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MMP-2-MMP-9 明膠酶譜法檢測試劑盒

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具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號

品       牌GEMIG

廠商性質(zhì)其他

所  在  地南京市

更新時間:2024-11-13 17:20:18瀏覽次數(shù):426次

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MMP-2-MMP-9 明膠酶譜法檢測試劑盒:本試劑盒采用凝膠反相酶譜法(Zymography)檢測MMP-2、MMP-9 活性及其無活性前體酶原譜系。Zymography 是一種廣為使用的、基于SDS-PAGE 電泳和反相凝膠染色的蛋白酶檢測方法,其靈敏度可達(dá)1 nM,高于ELISA方法,其基本原理和程序是:制備含有膠原酶底物的SDS-PAGE凝膠,含蛋白酶的樣品在此凝膠中進(jìn)行電泳

本試劑盒采用凝膠反相酶譜法(Zymography)檢測MMP-2、MMP-9 活性及其無活性前體酶原譜系。Zymography 是一種廣為使用的、基于SDS-PAGE 電泳和反相凝膠染色的蛋白酶檢測方法,其靈敏度可達(dá)1 nM,高于ELISA方法,其基本原理和程序是:制備含有膠原酶底物的SDS-PAGE凝膠,含蛋白酶的樣

品在此凝膠中進(jìn)行電泳,電泳時SDS與樣本中的MMP可逆性結(jié)合,導(dǎo)致MMP氫鍵和疏水鍵破壞而不能發(fā)揮分解明膠的作用。電泳結(jié)束后取出凝膠與酶反應(yīng)Buffer孵育,MMP恢復(fù)活性,凝膠中由于含底物蛋白而被深染,形成深色背景,但在有蛋白酶條帶的位置,蛋白酶將降解凝膠中的底物蛋白,因而不被染色

而形成透亮區(qū)域,從而能同時指示MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶譜)及活性。本試劑盒提供MMP-2、MMP-9特異蛋白底物及酶學(xué)反應(yīng)緩沖液,可檢測少至0.1~0.5 μl 血液中的MMP-2、MMP-9 酶譜及活性,檢測靈敏度~1nM。試劑盒可進(jìn)行25-50次標(biāo)準(zhǔn)小膠檢測(如果樣本MMP含量高,孵育時間短,不用換液可最多50次),如果小膠加樣孔為10~15個,則總計可最多檢測500~750個樣品。


檢測目的:

本試劑盒用于檢測組織、細(xì)胞中MMP-2、MMP-9 酶譜活性及其前體酶原酶譜。


MMP-2-MMP-9 明膠酶譜法檢測試劑盒說明:

1. 10 mM EDTA能夠完-全抑制MMP活性。

2. 凝膠干燥:可使用聚丙烯酰胺凝膠干膠裝置室溫快速干燥凝膠,作為永-久記錄保留。

3. 本試劑盒僅供科研實驗使用,不得用于食用、臨床醫(yī)療等其它用途。

4.實驗操作中,請穿戴好實驗服、防護(hù)口罩和一次性實驗手套,避免直接接觸。嚴(yán)禁入口。


MMP-2-MMP-9 明膠酶譜法檢測試劑盒染色步驟:

1. 此染色液即為工作液,使用時直接將聚丙烯酰胺凝膠放在培養(yǎng)皿中以考馬斯亮藍(lán)染色液覆蓋凝

膠,并緩慢搖動2h;

2. 傾去染色液,用脫色液沖洗凝膠;

3. 以脫色液覆蓋凝膠,緩慢搖動2h,傾去脫色液,再加入新脫色液進(jìn)行脫色,直至出現(xiàn)透亮區(qū)域,此透亮

區(qū)域為 MMP 條帶的位置。(通常此過程需要 2~4h,也可脫色過夜至出現(xiàn)清晰透亮條帶和干凈的背景);

4. 對凝膠進(jìn)行分析和照相,凝膠可放置在7%的乙酸中保存。也可用凝膠干膠裝置對凝膠進(jìn)行處理后保存。

說明:

A. 染色液含有甲醇,呈酸性,具有輕微腐蝕性,請穿戴好實驗服和一次性實驗手套,不要直接接觸。

嚴(yán)禁入口。使用完成后,請密封保存;

B. 脫色液配方:冰醋酸:甲醇:水=7:5:88(V:V:V);

C. 保存液:7%冰醋酸;

D. 凝膠染色之后,染色液可以回收利用,裝入新容器內(nèi),4oC保存,可反復(fù)使用2-3次。



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