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土壤硝酸還原酶(S-NR)試劑盒操作原來這么方便!

時間:2018/12/3閱讀:1774
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土壤硝酸還原酶(S-NR)試劑盒操作原來這么方便!

 

硝酸還原酶是一種氧化還原酶,可催化硝酸離子還原成亞硝酸離子的反應。
硝酸還原酶位于細胞質內或細胞膜外,在硝酸鹽還原途徑中是限速因子,通過 NADH和 NADPH 其中之一或兩者( 雙功能) 提供兩個電子催化反應,使硝酸鹽轉換成亞硝酸鹽。

 

硝酸還原酶是同源二聚體,每個亞基分子質量約100~110kDa,包含三個功能區,從N-末端到C-末端分別是:鉬輔酶MoCo(硝酸鹽結合與降解區域),血紅素-Fe(細胞色素b5結合域)和FAD(黃素腺苷酸二核苷酸磷酸、細胞色素b還原酶、NADH或NADPH結合域)。這三個區域是氧化還原中心,催化電子從NADP或NADPH轉移到硝酸鹽上。這三個結構和功能域通過hingeⅠ和hingeⅡ兩個鉸鏈連接起來。

 

植物體內,hingeⅠ連接細胞色素b5結合域和鉬輔酶/二聚化區域,它包含一個保守的磷酸化絲氨酸殘基,被具有調控作用的14-3-3二聚體識別,在植物、真菌和哺乳動物細胞中這個二聚體來自一個高度保守的基因家族。在二價陽離子存在的情況下,hingeⅠ把硝酸還原酶轉換成*無活性的復合體,使之不能行使從NADPH到硝酸鹽之間的電子轉移,從而抑制酶的活性。

 

產品說明:

S-NR 催化土壤中硝酸鹽還原為亞硝酸鹽,是土壤硝態氮還原的關鍵酶。研究S-NR 的活性對合理施肥,降低氮素的損失具有重要意義。
S-NR 催化硝酸鹽還原為亞硝酸鹽,NO3ˉ +NADH+H+→ NO2ˉ +NAD++H2O;產生的亞硝酸鹽
能夠在酸性條件下,與對–氨基苯磺酸及 α - 萘胺定量生成紅色偶氮化合物;未反應的NADH會抑
制后續的顯色反應,用PMS將其中和后再進行后續反應;生成的紅色偶氮化合物在 520 nm 有大
吸收峰,可用分光光度法測定。

 

自備實驗用品及儀器:
可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量比色皿/96孔板、冰和蒸餾水。

 

活性計算:

1、標準曲線繪制:
以 0.8、0.6、0.4、0.2、0.1μmol/mL 標準溶液為橫坐標,ΔA 標準為縱坐標繪制標準曲線,得到
線性回歸方程 y=kx+b,將ΔA 測定代入方程得到 x(μmol/mL);

2、S-NR 活性計算
單位的定義:24h 每 g 土樣中產生 1μmol NO2ˉ的量為一個 S-NR 活力單位。
S-NR(U/g)=x×V 標準÷W÷T
=24×x
V 標準:反應體系中加入的標準液體積,0.1mL;W:樣本鮮重,0.1g;T:反應時間,1/24h。

 

注意事項:

1、試劑一、試劑二和試劑四在冰上放置,用完立即放回-20℃。

2、每個測定管設一個對照管。

3、ΔA 測定過小(小于 0.01),可延長反應時間(37℃水浴時間)。

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