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產品描述
2 x Taq PCR Master Mix 是PCR 反應預混液，其中包含Taq DNA Polymerase、dNTPs、反應緩沖液、loading Dye 等成分，使用時只需取適量本產品，加入模板和引物，并加入 ddH2O 補足體積，使反應體系濃度為 1× 即可進行 PCR 反應。本產品最長可擴增 5kb DNA片段，具有良好的擴增特異性和模板兼容性， PCR 產物 3' 端帶突出 A 堿基，純化后可直接用于 T/A 克隆。
本產品中包含兩種染料，PCR反應完成后無需額外添加 loading buffer，可以直接進行電泳，且電泳過程中會出現兩個指示條帶。該染料不影響 PCR 擴增效率，但對于需要對 PCR 產物進行吸光度、熒光等光學分析的實驗，建議在分析前對 PCR 產物進行純化，或使用無染料的PCR預混液。
訂購信息
產品名稱 | 貨號 | 規格 |
2 x Taq PCR Master Mix | AN11L818 | 2*1mL |
2 x Taq PCR Master Mix | AN11L819 | 5*1mL |
運輸與保存
藍冰運輸。-20℃保存，有效期24個月。
使用方法
1. 常規 PCR 反應體系
組分 | 20 μL體系 | 50 μL體系 | 終濃度 |
2 x Taq PCR Master Mix | 10 μL | 25 μL | 1 x |
正向引物（10 μM）（1） | 0.4-0.8 μL | 1-2 μL | 0.2-0.4 μM |
反向引物（10 μM）（1） | 0.4-0.8 μL | 1-4 μL | 0.2-0.4 μM |
DNA 模板（2） | X μL | X μL | - |
ddH2O | To 20 μL | To 50 μL | - |
(1) 引物推薦終濃度為 0.2~0.4 μM，效果不佳時可以在 0.1~1 μM 濃度范圍內進行調整；
(2) 不同模板最佳反應濃度有所不同，以 50 μL 體系為例：模板為基因組 DNA 時，一般推薦的使用量為 10~400 ng；當模板為質粒或病毒 DNA 時，一般推薦的使用量為 10 pg~20 ng。
2. 常規 PCR 反應程序
步驟 | 溫度 | 時間 |
預變性（1） | 94℃ | 3~5 min |
變性 | 94℃ | 15 sec |
退火 | 53~65℃ | 15 sec |
延伸（2） | 72℃ | 30~60 sec/kb |
30~35 Cycles | ||
終延伸 | 72℃ | 5min |
(1) 該預變性條件適合絕大多數擴增反應， 對于一些復雜模板， 例如：菌液、菌落（尤 其是酵母）的PCR 擴增，預變性時間可適當延長至 10 min，以提高預變性效果；
(2) 關于延伸速率，當目的片段長度不超過 2 kb 時，推薦使用 30 sec/ kb；當目的片段長度大于 2 kb 時，推薦使用 60 sec/kb。延伸速率與模板復雜程度有關，如遇產率較低可適當提高延伸時間。
注：如果使用酵母菌液作為PCR 擴增模板，建議目的片段長度不超過2.5kb， 若超出2.5kb, 建議將酵母菌液預先進行破壁處理。
3. 凝膠濃度對應的染料遷移距離
瓊脂糖凝膠濃度 | 金色條帶 | 藍色條帶 |
0.8% | ~80 bp | 4000 bp |
1.0% | ~40 bp | 2000 bp |
1.5% | ~20 bp | 1500 bp |
2.0% | <10 bp | 1200 bp |
2.5% | <10 bp | 1200 bp |
3.0% | <10 bp | 1200 bp |
注：染料會影響吸光度。
注意事項
1. 本產品僅限于科學實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領域。
2. 本產品在短期 -20℃ 儲存時不會凝固，可以隨取隨用，如遇儲存溫度波動，體系結冰為正常現象不影響使用。
3. 建議將所有的反應組分在冰上配制，最后加入2 x Taq PCR Master Mix。
4. 使用基因組模板進行較長片段擴增需要使用高質量純化的DNA模板，可以提高 PCR 成功率。
5. 本產品擴增產物可用于 T/A 克隆。由于本產品含有 Loading Dye，PCR 產物需經過切膠回收后才可充分去除 Loading Dye。
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