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貨物所在地：上海上海市
更新時間：2024-11-21 17:13:52
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產(chǎn)品描述
EZ Trans siRNA轉(zhuǎn)染試劑，是一種基于陽離子高分子聚合物開發(fā)的新型轉(zhuǎn)染試劑，適用于siRNA 及microRNA (miRNA) 的轉(zhuǎn)染。本產(chǎn)品能在多種常見細胞中實現(xiàn)高效率、低毒性的轉(zhuǎn)染效果，且具有操作簡便，重復性佳等優(yōu)點，適用于 siRNA或miRNA 介導的基因抑制實驗。
訂購信息
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
EZ Trans siRNA轉(zhuǎn)染試劑 | AC04L051 | 300 uL |
EZ Trans siRNA轉(zhuǎn)染試劑 | AC04L052 | 1 mL |
運輸與保存
藍冰運輸。4℃保存，有效期 6個月；-30℃至-10℃保存，有效期12個月。注：避免反復凍融。
使用方法（以 24 孔板為例，其他培養(yǎng)皿中轉(zhuǎn)染請參考表 1）
1． 接種細胞
對于貼壁細胞：轉(zhuǎn)染前一天，將細胞按照每孔1-2x10^5個細胞的量進行鋪板，使其在轉(zhuǎn)染時密度為60%-80% 為佳。
對于懸浮細胞：轉(zhuǎn)染當天，配制轉(zhuǎn)染試劑-核酸復合物之前，用PBS清洗細胞1-2次，用250 μL Opti-MEM I 減血清培養(yǎng)基 (無血清) 重懸細胞，在24孔板中進行細胞鋪板，細胞密度為60-80%。
2． 準備轉(zhuǎn)染試劑-siRNA復合物（或轉(zhuǎn)染試劑-miRNA復合物）
(1) 對于每孔細胞，取2 μLsiRNA (20 μM，DEPC水溶解)加入到1.5mL離心管中，加入2 μL轉(zhuǎn)染試劑與siRNA 混合，室溫孵育3 min。
(2) 往上述混合物中加入100 μL Opti-MEM I減血清培養(yǎng)基(無血清)，輕輕混勻，在室溫下靜置30 min，形成轉(zhuǎn)染試劑-核酸復合物。
(3) 30 min后，往上述復合物中加入250 μLOpti-MEM I減血清培養(yǎng)基(無血清)，輕輕混勻。
3． 轉(zhuǎn)染細胞
(1) 細胞用 PBS 清洗 1-2 次，將上述 350µL 轉(zhuǎn)染試劑-siRNA 復合物加入每孔細胞。可在轉(zhuǎn)染 6h 后換液或者補充 150μL 培養(yǎng)基 (含血清)，總體積達到 500μL，即達到常規(guī)的培養(yǎng)皿使用培養(yǎng)液的量。
(2) 在 37℃，5% CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng) 24-48 h，之后即可檢測基因干擾效果或者后續(xù)功能實驗。
注意事項
1、本產(chǎn)品僅限于科學實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領域。
2、小 RNA(siRNA/miRNA)質(zhì)量：請務必使用高純度無內(nèi)毒素轉(zhuǎn)染級 RNA。
3、整個實驗過程使用無 RNA 酶和無熱原性的材料，如離心管、槍頭、緩沖液。
4、細胞條件：細胞狀態(tài)會極大影響轉(zhuǎn)染效率，待轉(zhuǎn)染細胞應處于良好生長狀態(tài)，建議使用生長處于指數(shù)期、存活率大于 90% 的細胞進行轉(zhuǎn)染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞，請在轉(zhuǎn)染前至少傳代兩次。
5、siRNA 與轉(zhuǎn)染試劑使用比例：對于大多數(shù)細胞系，轉(zhuǎn)染復合物中siRNA (20 μM Stock)與轉(zhuǎn)染試劑的比例在1:1 至1:3 之間，推薦比例為1:2。想要獲得優(yōu)的基因干擾結(jié)果，需要對這一比例進行優(yōu)化。
6、由于某些特殊培養(yǎng)基中的成分可能會抑制陽離子聚合物介導的轉(zhuǎn)染，因此建議測試這些培養(yǎng)基與本產(chǎn)品的相容性，以確保最佳轉(zhuǎn)染效果。
7、細胞類型、基因特性、siRNA/miRNA 的效力、靶 mRNA 的半衰期和靶蛋白的周轉(zhuǎn)率等因素都會影響siRNA/miRNA 介導的基因敲低效果。
8、建議 siRNA/miRNA 工作濃度在 10-100nM 之間，轉(zhuǎn)染試劑的體積應根據(jù) siRNA/miRNA 濃度和培養(yǎng)皿的大小進行調(diào)整，請參見表 1。
表 1：不同培養(yǎng)體積對應的待轉(zhuǎn)siRNA/miRNA、 EZ Trans、稀釋液用量
培養(yǎng)器皿 | 培養(yǎng)液體積 （mL） | RNA （20 μM ） （μL） | 轉(zhuǎn)染試劑 (μL) | Opti-MEM I培養(yǎng)基a (μL) | Opti-MEM I培養(yǎng)基b (μL) |
96 孔板 | 0.1 | 0.2 | 0.4 | 20 | 50 |
24 孔板 | 0.5 | 1 | 2 | 100 | 250 |
12 孔板 | 1 | 2 | 4 | 200 | 500 |
6 孔板 | 2 | 4 | 8 | 400 | 1000 |
60 mm 培養(yǎng)皿 | 4 | 8 | 16 | 800 | 2000 |
100 mm 培養(yǎng)皿 | 10 | 20 | 40 | 2000 | 5000 |
注：該表使用量僅供參考，具體使用量還需根據(jù)細胞類型及其他實驗條件進行優(yōu)化。a: 稀釋轉(zhuǎn)染試劑-RNA復合物所需培養(yǎng)基的量；b: 加入轉(zhuǎn)染試劑-RNA復合物的培養(yǎng)基的量。
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