Bis-Tris蛋白預(yù)制膠的使用方法通常包括以下幾個(gè)步驟，這些步驟可能會(huì)因不同的品牌和型號(hào)而略有差異，但總體流程大致相同：
一、準(zhǔn)備工作
選擇合適的預(yù)制膠：根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，選擇適當(dāng)?shù)腂is-Tris蛋白預(yù)制膠濃度和規(guī)格。
取出預(yù)制膠：從包裝袋中取出預(yù)制膠，并撕去底部的密封膠帶(通常為藍(lán)色或透明色)。
固定預(yù)制膠：將預(yù)制膠固定在電泳槽中，確保膠板與電泳槽的接觸面平整，且密封良好以防止漏液。
二、電泳緩沖液準(zhǔn)備
準(zhǔn)備電泳緩沖液：根據(jù)預(yù)制膠的說(shuō)明，準(zhǔn)備適量的電泳緩沖液。通常，Bis-Tris蛋白預(yù)制膠使用的是MOPS或MES緩沖系統(tǒng)，而非Tris-Glycine等其他電泳緩沖液。
加入電泳緩沖液：向內(nèi)槽中加入足夠的電泳緩沖液，確保浸沒(méi)點(diǎn)樣孔；外槽中的電泳緩沖液應(yīng)至少?zèng)]過(guò)電泳槽底部的陽(yáng)極，但不可漫過(guò)膠板。
三、上樣
處理樣品：將蛋白樣品與Loading buffer按比例混合均勻，并根據(jù)需要進(jìn)行加熱處理(如使蛋白變性)。
加樣：使用移液器將處理好的蛋白樣品加入預(yù)制膠的加樣孔中，注意避免槍頭戳破凝膠或過(guò)度插入梳孔造成漏液。同時(shí)，注意每個(gè)加樣孔的容量限制，以避免溢出。
四、電泳
設(shè)置電泳條件：根據(jù)預(yù)制膠的說(shuō)明或?qū)嶒?yàn)需求，設(shè)置合適的電泳電壓和時(shí)間。通常，Bis-Tris蛋白預(yù)制膠的電泳條件為100150V，電泳時(shí)間4060分鐘。
啟動(dòng)電泳：將電泳槽插上電源線，并將電源線插頭插入電泳儀電源插孔。然后，選擇合適的電泳條件并啟動(dòng)電泳儀。
觀察電泳過(guò)程：在電泳過(guò)程中，可以觀察溴酚藍(lán)指示帶的移動(dòng)情況，以判斷電泳的進(jìn)度和是否需要調(diào)整電泳條件。
五、凝膠取出與后續(xù)處理
電泳結(jié)束：當(dāng)溴酚藍(lán)指示帶電泳至膠板底部或?qū)嶒?yàn)預(yù)定位置時(shí)，結(jié)束電泳。
取出凝膠：關(guān)閉電泳儀并斷開(kāi)電源后，從電泳槽中取出預(yù)制膠。使用撬具或刀片小心插入膠板之間的空隙，撬動(dòng)膠板上、中、下三個(gè)位置，直至膠板完全分離。
凝膠處理：將有凝膠的膠板一側(cè)浸入水中(通常為蒸餾水)，貼著水面輕輕提起膠板，使凝膠從膠板上脫落。然后，將凝膠取出進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)，如染色、成像等。
六、注意事項(xiàng)
安全操作：實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作，確保個(gè)人安全。
避免污染：在操作過(guò)程中，避免電泳緩沖液、樣品等化學(xué)物質(zhì)濺入眼睛或皮膚；同時(shí)，也要防止這些物質(zhì)污染實(shí)驗(yàn)器材和凝膠。
電泳條件調(diào)整：根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求和預(yù)制膠的說(shuō)明，可以適當(dāng)調(diào)整電泳電壓和時(shí)間以獲得最佳實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
凝膠保存：如果凝膠需要保存以備后續(xù)使用，應(yīng)將其浸泡在適當(dāng)?shù)谋４嬉褐校?chǔ)存在低溫條件下(如4℃)。
遵循以上步驟和注意事項(xiàng)，可以確保Bis-Tris蛋白預(yù)制膠的正確使用和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
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