BCA (Bicinchoninic acid) 法是目前應用比較廣泛的蛋白質濃度測定方法。基于雙縮脲反應，即在堿性環境下蛋白質將Cu2+還原成Cu+，Cu+與BCA試劑形成紫顏色的絡合物，在562 nm處有高的吸光值，該反應產物的量與蛋白質濃度成正比。測定其在562 nm處的吸光值，并與標準曲線對比，即可計算待測蛋白的濃度。該方法快速靈敏、穩定可靠且對不同種類蛋白質變異系數很小。試劑盒中提供了濃度穩定的蛋白標準品用于制作標準曲線。
BCA蛋白定量試劑盒產品作用
準確靈敏，線性范圍廣：BCA 試劑的蛋白質測定范圍是 10-2000μg/mL。
快速：45 分鐘內完成測定，比經典的 Lowry 法快 4 倍而且更加方便。
經濟實用：在微孔板中進行測定，可大大節約樣品和試劑用量。
效果穩定：不受樣品中離子型和非離子型去污劑影響，檢測不同蛋白質分子的變異系數遠小于考馬斯亮藍。
BCA蛋白定量試劑盒使用說明
一、配制標準品和工作液
1. 配制 BSA 標準品體系（線性范圍 20-2000 μg/mL 或者 5-250μg /mL 標準品制備各 2 種配置方法，請根
據習慣選用恰當方式）。
2. 配制 BCA 工作液
(1) 計算所需要的總 BCA 工作液體積。總 BCA 工作液體積=（標準品數量+待測樣品數量）x 重復數 x 每個
樣品所需要的 BCA 工作液。
(2) 配制 BCA 工作液：50 體積的 BCA 試劑 A 中加入 1 體積的 BCA 試劑 B（A:B=50:1），充分混勻。
二、檢測方法
1. 試管檢測方法（樣品:BCA 工作液=1:20）
(1) 各取 100 μL 標準品和待測樣品加入到反應管中。
(2) 每管加入 2.0 mL BCA 工作液，混勻。根據待測樣品的濃度范圍選擇孵育時間和溫度。
標準孵育方法：37℃ 孵育 30 min 或者室溫 2h（檢測范圍：20-2000 μg/mL）
增強孵育方法：60℃ 孵育 30 min（檢測范圍：5-250 μg/mL）
(3) 冷卻到室溫。在分光光度計上進行檢測，設定波長為 562 nm，在 10 min 內對所有樣品讀數。
(4) 根據 BSA 標準品的吸光度（減去標準品中空白孔的 OD 值即最終的讀數），繪制標準曲線（X-蛋白濃
度μg/mL；Y-最終的 OD 562nm）。依據標準曲線和樣品的稀釋倍數計算樣品蛋白濃度。
2. 微孔板檢測方法（樣品: BCA 工作液=1:20）
(1) 各取 10 μL 標準品和待測樣品加入到微孔板中。
(2) 每孔加入 200 μL BCA 工作液，槍頭吹打充分混勻。蓋上微孔板，37℃ 孵育 30 min。
(3) 冷卻到室溫，在酶標儀上的 562 nm 波長范圍處檢測吸光度。
(4) 根據 BSA 標準品的吸光度（減去標準品中空白孔的 OD 值即最終的讀數），繪制標準曲線（ X-蛋白濃
度μg/mL；Y-最終的 OD 562nm）。依據標準曲線和樣品的稀釋倍數計算樣品蛋白濃度。
BCA蛋白定量試劑盒注意事項
1、為保證蛋白濃度測量的準確性，最好做3個復孔，必要時剔除離群值。
2、BCA法測蛋白濃度易受時間及溫度的影響，所以最好每次測定都做標準曲線。
3、加樣時一定要準確加樣且盡可能避免氣泡產生，以免影響測量（加樣結束可以用注射器戳破氣泡，并將96孔板放在搖床上混勻片刻，以使樣品與工作液充分接觸）。
4、孵育結束應盡快檢測吸光度，并盡可能加快檢測速度，以免帶來誤差。
5、確保所有試劑在使用前充分混合且在推薦的溫度下存儲。試劑的新鮮度對實驗結果有顯著影響，過期或不當存儲的試劑可能導致不準確的結果。
6、在進行BCA實驗時，嚴格按照試劑添加順序和操作步驟進行，避免任何步驟的顛倒或省略。
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