在使用安捷倫鏈霉親和素產(chǎn)品的時候，可能很多客戶對有些部分不知道怎么使用，或者對產(chǎn)品有一些問題疑惑。那通過本文講解鏈霉親和素使用竅門與技巧，就能幫助大家解決這些問題了。當(dāng)然，更多關(guān)于鏈霉親和素使用的問題，如本文沒提及到，可以聯(lián)系我們欣博盛生物。

1.我可以用水溶解凍干鏈霉親和素嗎？還是必須用 PBS？

鏈霉親和素易溶于水或含鹽緩沖液，濃度高達 50 mg/mL 以上。在中性或酸性 pH 條件下，凍干鏈霉親和素在重新溶解于水或其他低離子強度緩沖液時，可能會發(fā)生聚集。安捷倫鏈霉親和素已在弱堿性 pH 下從稀氯化鈉溶液中凍干，從而盡可能減少聚集體的形成。在極少數(shù)情況下，鏈霉親和素在溶于去離子水或低離子強度緩沖液時可能含有少量的不溶物質(zhì)，無論是在最初溶解時還是在凍融循環(huán)后。在含鹽緩沖液（例如 PBS）存在的情況下，通常觀察不到這種效果。如果觀察到未溶解物質(zhì)，可以通過離心將其去除，它們不會構(gòu)成總蛋白質(zhì)的重要部分。

2.如何復(fù)溶鏈霉親和素以避免形成聚集體？

對于 1 g 或 100 mg 溶液瓶，我們的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)是加入足量的緩沖液，使其溶解至 20–50 mg/mL，然后立即開始旋轉(zhuǎn)溶液瓶。例如，您可以將溶液瓶放在工作臺上，并以緊密的圓周運動方式將其迅速移動。繼續(xù)旋轉(zhuǎn)直到蛋白質(zhì)溶解，這可能需要幾分鐘，從而盡可能減少聚集體的形成。如果之后有一點混濁，請先通過離心將其去除再使用該材料。當(dāng)以這種方式溶解時，離心后的回收率應(yīng)與溶液瓶上顯示的 A280 測量結(jié)果一致。

在溶于水或低離子強度緩沖液時，避免聚集體形成是最重要的一點（如 SA10 技術(shù)數(shù)據(jù)表中所述）。在 PBS 和更高離子強度緩沖液中復(fù)溶鏈霉親和素似乎對持續(xù)攪動不太敏感。然而，即使在使用 PBS 時也不要只是添加緩沖液，讓溶液瓶保持不動，然后等待鏈霉親和素溶解。對于分配到微量離心管中的 10 mg 樣品和其他樣品，添加足量的緩沖液使其溶解至 5–50 mg/mL。然后通過上下移液進行混合，直到觀察到內(nèi)容物已經(jīng)溶解。對于這樣的少量樣品，復(fù)溶非常迅速。

3.產(chǎn)品中是否含有鹽等添加劑？

安捷倫鏈霉親和素以凍干形式提供，每毫克凍干產(chǎn)品含有約0.9 mg 蛋白質(zhì)；其余為氯化鈉。因此，每毫克凍干產(chǎn)品含有0.1 mg 氯化鈉 (10%)。但我們按蛋白質(zhì)含量進行分配，如果您購買一克鏈霉親和素，您將收到一克鏈霉親和素和額外的鹽，而不是總共一克凍干產(chǎn)品。我們提供 NaCl 的含量信息，為稱量產(chǎn)品的客戶提供參考。

4.在SDS-PAGE 凝膠上觀察到的 SA10 鏈霉親和素分子量應(yīng)該為多少？ 

（分析證書指出該產(chǎn)品應(yīng)主要作為 SDS-PAGE 的單一條帶運行。）

鏈霉親和素是分子量約為 52 kDa 的同源四聚體。隨著SDS-PAGE 樣品緩沖液中的熱變性，鏈霉親和素四聚體

分解為單體，在 SDS-PAGE 凝膠上以約 13 kDa 運行。在SDS-PAGE 處理之前，必須將鏈霉親和素加熱至沸騰（例如，在含有 0.2% SDS 的上樣緩沖液中于 100 °C 下加熱 20 分鐘），使蛋白質(zhì)*變性。否則，四聚體可能無法*分解為單體，SDS-PAGE 上可能出現(xiàn)四聚體形式。鏈霉親和素中沒有半胱氨酸殘基（因此沒有二硫鍵），因此樣品緩沖液中是否存在還原劑（如 DTT 或 β-巰基乙醇）不會有什么不同。

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