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上海橋星貿易有限公司
主營產品： 進口透析袋,密理博ECL發光液,B27無血清培養基,Gibco膠原酶 |
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2023-7-25 閱讀(1218)
共聚焦實驗中培養耗材的選擇
激光共聚焦顯微鏡可以觀察到細胞內已經標記好的蛋白質和分子，為生物學研究提供了更直觀的觀測方法。如今，激光共聚焦成像已經是一個非常常規的實驗操作，應用于生物學各個研究領域中。在細胞實驗中，如果要進行一次激光共聚焦成像，除了要知道相關的顯微鏡參數設置和操作以外，樣品的準備也是非常重要的一環。
爬片的使用
由于激光共聚焦實驗對觀測耗材的底部有著比較高的要求，普通的培養皿，培養板或者培養瓶都不能直接用于激光共聚焦成像。
1.比較常用的是使用170μm左右厚度的蓋玻片作為激光共聚焦成像的細胞載體。但是使用蓋玻片，在實驗操作上是非常麻煩的，有時候需要將蓋玻片清洗并且烘干滅菌，才能開始使用。2.細胞爬片，雖然不需要清洗，但是還是需要進行包被才能讓細胞正常貼壁生長。通常是將處理好爬片直接放在多孔板中，然后鋪細胞，熒光染色后，再用鑷子將爬片拿出，反過來放在滴有封片劑（甘油配置）的載玻片上，再進行成像。如圖一所示：
圖一：使用蓋玻片和細胞爬片的做免疫熒光方法示意圖。
玻底培養皿/板的使用方法
這里要介紹的方法，大大簡化了樣品準備流程，需要用到專為共聚焦實驗設計的共聚焦培養皿。共聚焦培養皿的底部為0.16-0.19mm的硼硅酸鹽玻璃，結合了標準培養皿/板的便利性和蓋玻片的成像優勢，可提供高倍放大顯微鏡及共聚焦圖像分析所需的最佳光學特性。
所有的操作都在培養皿中進行，不再需要鑷子以及繁瑣的清洗，滅菌，包被程序（流程如圖二所示）
圖二：共聚焦專用培養皿的準備樣品流程，可以直接進行細胞培養－染色－成像操作
操作流程
1. 在超凈臺中打開共聚焦專用培養皿的滅菌包裝，拿出培養皿，加入細胞懸液，蓋上皿蓋，放入培養箱中靜置，等待細胞貼壁。常規細胞培養，待細胞長置合適密度再取出，進行免疫熒光染色。
2. 吸出培養基，以PBS清洗細胞，再用2%的多聚甲醛PBS溶液固定細胞。
3. 20分鐘后，吸出固定液，加入0.1%Triton X-100
4. 10分鐘后，吸出Triton，清洗細胞后加入BSA封閉。
5. 加入抗體熒光染色后，吸出所有試劑，加入封片劑，可以開始共聚焦顯微成像。
使用共聚焦培養皿還有個好處：往往一個共聚焦掃描成像持續時間很長，培養皿中的液體非常容易揮發，共聚焦培養皿有皿蓋，可以減少揮發。
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