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上海橋星貿易有限公司
主營產品： 進口透析袋,密理博ECL發光液,B27無血清培養基,Gibco膠原酶 |
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2021-4-6 閱讀(2368)
一步法快速蛋白染色液說明書
一步法快速蛋白染色液說明書
SmartBuffers®一步法快速蛋白染色液是已配制好可直接使用的蛋白凝膠電泳染色劑，速度快,靈敏度高, 安全無毒,效果好。該產品是真正的實現一步蛋白染色。只需簡單的從電泳槽中取出凝膠、放入染色劑中，就可離開了。無需漂洗、微波加熱、固定或脫色。凝膠的蛋白條帶2分鐘內即可見。凝膠可以無限期留在染色液中, 只有蛋白質被染色，不會增加背景染色。
產品特色：
方便快捷-不用漂洗，不用加熱，不用脫色，不用固定，條帶 2 分鐘可見。
安全環保-不含任何腐蝕性的強酸（如：磷酸、鹽酸、乙酸等），不含任何對人體有害的甲醇和乙醇。
靈敏度高-檢測下限 2ng 蛋白。
兼容性好-適用于變性和非變性膠以及質譜分析。
Order Information訂貨信息：
Art.No. 目錄編碼 | Product Name 產品名稱 | Product Description 產品描述 | Pack. 產品包裝 |
FBS-0125 | 一步法快速蛋白染色液 | 考馬斯亮藍染料、酸和增溶劑 | 125mL |
FBS-1000 | 500mL |
存儲條件：
密封，室溫存儲，一年有效。
重要提醒：
1、在染色之前，不需要或不建議進行多次清洗。
2、不需要也不建議在用前采取酒精/乙酸固定步驟。
3、凝膠可以在染色1小時后儲存在超純水中。凝膠也可以長時間留在染色液中, 只有蛋白質被染色，不會增加背景染色。
4、染色液可以重復利用 2-3 次，靈敏度會有輕微下降，如重復使用請延長染色時間。
染色的步驟：
1、將電泳后的凝膠取下放入染色容器中，用適量蒸餾水漂洗一下。
棄蒸餾水，加入適量染色液（以覆蓋過膠面為宜），在室溫下進行溫和的搖晃后達到適當的強度。
觀察記錄凝膠。
待檢測蛋白量 | 染色時間 |
>1 μg | 2 分鐘 |
100ng-1μg | 10 分鐘 |
25ng-100ng | 30分鐘 |
2ng-25ng | 60分鐘 |
凝膠干燥的步驟：
1、確保凝膠染色至少1小時。雖然蛋白質帶在染色幾分鐘后就會顯現，但染色過程通常在1小時培養后完成。根據你使用的凝膠類型，可能需要更長的孵化時間。在完成染色過程之前進一步加工凝膠可能導致蛋白質的脫色和靈敏度降低。如果發生這種情況，只需在染色液中進行隔夜孵化，即可保留凝膠。
2、將凝膠浸入大約100毫升的超純水中，溫度為70°C（在微波爐中加熱30到60°C）。在輕輕搖晃的同時至少孵化1小時。可加入選擇性吸附紙或紙巾。凝膠可以在水中隔夜孵化。
3、在“凝膠干燥溶液”（如4%甘油，20%乙醇在水中）中孵化凝膠2分鐘。在酒精溶液中孵出任何帶有考馬斯亮藍的凝膠，終都會導致條帶的染色，因此避免孵出時間超過5分鐘。
4、這種凝膠現在可以在濕的玻璃紙膜之間干燥了。
用于質譜（MS）分析的處理步驟：
1、切除染色的目標蛋白帶并轉移到一個干凈的EP管。
2、加入1毫升30%乙醇或30%丙酮或30%乙酸（注意：乙酸可能導致N-端的乙酰化）。
3、孵化20min（在60°c–70°c孵化，以提高脫色效率）。
4、至少三次重復第2和第3步，或直到凝膠清晰。
常見問題Q&A：
常見問題Q | 解決辦法A |
染色原理是什么？ | 與經典考馬斯亮藍 G250染色原理相同（與蛋白質中堿性氨基酸結合），優點是更加快速和更高的靈敏度。 |
染色后的凝膠能做質譜分析嗎？ | 可以。請參閱“用于質譜（MS）分析的處理步驟”。 |
能重復使用嗎？ | 可以重復使用 2-3 次。 但靈敏度有所下降，可以通過延長染色時間來彌補。 |
染膠的適合溫度是多少？ | 為達到適合的染色效果，推薦常溫（20-25℃）染色。 |
需要低溫貯存嗎？ | 不需要低溫貯存，常溫貯存（20-25℃）即可。4-8℃貯存，會有結晶產生，37℃溫浴融化后可繼續使用。 |
染色后，凝膠可以用蒸餾水保存嗎？ | 可以，蒸餾水保存很簡單，也可以保存在染色液中。 |
染色的凝膠能做 Western Blot嗎？ | 不可以。蛋白的染色是不可逆的，染色的凝膠不能用作下游的轉膜操作。 |
為什么凝膠過夜染色后條帶出現涂抹狀拖尾？ | 過夜染色不會對凝膠過度染色。 出現抹涂狀拖尾原因是：上樣量太大或分子量較小導致。 |
該染色液有固定凝膠的作用嗎？ | 沒有固定凝膠的作用。由于染色會在 60 分鐘內完成，染色前無需對凝膠進行固定。 |
