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Corning	88-570-kit	NK Kit for activation and expansion of human natural killer cells NK細胞活化/擴增培養基套裝	1Kit
套裝包含	活化用	Pre-coated T-75 flask 抗體預包被T75細胞培養瓶	1瓶
		NK primary medium NK細胞活化培養基	1×50 mL
		NK primary supplement NK細胞活化添加劑	1×1.8 mL
	擴增用	Expansion medium NK細胞擴增培養基	1×1000 mL
	配件	細胞培養袋	1 x 640 cm²

華雅再生醫學旗艦公司：紅榮微再（上海）生物工程技術有限公司*代理Corning免疫細胞治療產品。紅榮微再以“傳遞科學價值，服務科學研究”為宗旨，主營干細胞、精準醫療、細胞治療、器官再生四大板塊的產品。

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Corning® NK細胞活化擴增培養套裝

Corning® NK細胞活化擴增培養套裝性能

圖1. NK細胞在Corning培養基中能夠得到更有效的擴增

圖2. Corning培養基中獲得的NK細胞具有更高的細胞毒性

健康人的PBMC細胞接種數量為3x10⁷ ，根據廠家建議進行細胞培養。使用Corning培養基時，0-5天使用NK活化培養基 (Primary Medium)，6-14天使用NK 擴增培養基 (NK Expansion Medium )添加1000 IU/mL IL-2 進行培養。細胞培養至14天收獲，進行細胞計數和腫瘤殺傷能力檢測。腫瘤殺傷實驗

使用的靶細胞為K562細胞。

圖３. Corning培養基中獲得的NK細胞具有更高的CD3-CD56+陽性率 (83.0% vs 67.6%)。

健康人的PBMC細胞根據廠家建議進行細胞培養。細胞培養至14天收獲，進行細胞計數和檢測。細胞使用CD3 FITC /CD56 PE進行染色，之后使用BD AccuriTM C6 flow cytometer進行檢測。

Corning® NK細胞活化擴增培養套裝使用方法

NK 細胞擴增和活化

1. 抗凝血室溫離心，400 xg，10min，上層血漿轉移到新管。

2. 熱滅活自體血漿，56°C，30min。離心， 800 xg ， 20 min，去除沉淀。4°C 保存上清血漿，培養備用。

3. 加入等體積PBS（不含鈣鎂）替代被移除血漿保持體積不變，小心重懸血細胞。

注意：PBS預加0.1%人血清白蛋白（HSA）利于保持血細胞活性。

4. 使用淋巴細胞分離液從上面的血樣中制備PBMCs（人外周血單個核細胞）。

注意：使用新鮮采集的人血（2h內采集）有利培養，不要使用超過24h的血樣。

5. 至少5倍體積的PBS（不含鈣鎂）清洗PBMCs。室溫離心500xg，10min，收集PBMCs。

6. PBMCs稀釋到 1 x 10⁶ cells/mL，使用NK活化培養基配比1.8mL NK活化添加劑和10%自體血漿。

7. 預包被T-75培養瓶使用前，用PBS（不含鈣鎂）清洗兩次。

8. 添加30 mL PBMC懸液到預包被T-75培養瓶，37°C，5% CO2培養。

注意：第六天之前，如果培養基變黃，細胞密度超過2.0 x 10⁶ cells/mL，需要添加新鮮的NK活化培養基配比10%自體血漿，保持細胞密度大于 5 x 10⁵cells/mL。

9. 培養第六天，培養液離心，適量NK擴增培養基（1000 IU/mL IL-2 和10%自體血漿）重懸細胞，再轉移到T-225培養瓶或透氣細胞培養袋。

10. 每隔兩三天，根據細胞擴增狀態，培養體系中添加新鮮的NK擴增培養基（1000 IU/mL IL-2 和10%自體血漿）保持細胞密度在5 x 10⁵到 2.0 x 10⁶ cells/mL之間。

注意：NK擴增階段，所加新鮮培養基自體血漿含量推薦范圍：0.5%-1%。

11. 培養14天左右，收獲NK細胞。

注意：整個實驗過程中，細胞懸液吹打和培養容器拍打都要輕柔，以避免細胞損傷，保持細胞活性。

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