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二手熱循環(huán)儀PCR儀的一些技術(shù)要點(diǎn)詳細(xì)闡述

閱讀:582        發(fā)布時(shí)間:2017-7-14
     在二手熱循環(huán)儀PCR儀設(shè)計(jì)基礎(chǔ)上增加熒光信號(hào)激發(fā)和采集系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng),形成了具有熒光定量PCR功能的儀器。其PCR擴(kuò)增原理和普通PCR擴(kuò)增原理相同,二手熱循環(huán)儀PCR儀時(shí)加入的引物是利用同位素、熒光素等進(jìn)行標(biāo)記,使用引物和熒光探針同時(shí)與模板特異性結(jié)合擴(kuò)增。擴(kuò)增的結(jié)果通過(guò)熒光信號(hào)采集系統(tǒng)實(shí)時(shí)采集信號(hào)連接輸送到計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng),得出量化的實(shí)時(shí)結(jié)果輸出。
    二手熱循環(huán)儀PCR儀有單通道,雙通道和多通道之分。當(dāng)只用一種熒光探針標(biāo)記的時(shí)候,選用單通道;有多種熒光標(biāo)記的時(shí)候使用多通道。單通道也可以檢測(cè)多熒光的標(biāo)記和目的基因表達(dá)產(chǎn)物,因?yàn)橐淮沃荒軝z測(cè)一種目的基因的擴(kuò)增量,需多次擴(kuò)增才能檢測(cè)完不同的目的基因片段的量。多通道利于做多重PCR,實(shí)現(xiàn)一次檢測(cè)多種目的基因的功能。
    實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀主要應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)檢測(cè)、生物醫(yī)藥研發(fā)、食品行業(yè)、科研院校等。
    在二手熱循環(huán)儀PCR儀的基礎(chǔ)上增加一個(gè)熒光信號(hào)采集系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng),就成了熒光定量PCR儀。其PCR擴(kuò)增原理和普通PCR儀擴(kuò)增原理相同,只是PCR擴(kuò)增時(shí)加入的引物是利用同位素、熒光素等進(jìn)行標(biāo)記,使用引物和熒光探針同時(shí)與模板特異性結(jié)合擴(kuò)增。擴(kuò)增的結(jié)果通過(guò)熒光信號(hào)采集系統(tǒng)實(shí)時(shí)采集信號(hào)連接輸送到計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng)得出量化的實(shí)時(shí)結(jié)果輸出。把這PCR儀叫做實(shí)時(shí)二手熱循環(huán)儀PCR儀(qPCR儀)。熒光定量PCR儀有單通道,雙通道,和多通道。當(dāng)只用一種熒光探針標(biāo)記的時(shí)候,選用單通道,有多熒光標(biāo)記的時(shí)候用多通道。單通道也可以檢測(cè)多熒光的標(biāo)記的目的基因表達(dá)產(chǎn)物,因?yàn)橐淮沃荒軝z測(cè)一種目的基因的擴(kuò)增量,需多次擴(kuò)增才能檢測(cè)完不同的目的基因片段的量。該儀器主要用于醫(yī)學(xué)臨床檢測(cè),生物醫(yī)藥研發(fā),食品行業(yè),科研院校等機(jī)構(gòu)。
    把一次PCR擴(kuò)增只能運(yùn)行一個(gè)特定退火溫度的二手熱循環(huán)儀PCR儀,叫傳統(tǒng)的PCR儀,也叫普通PCR儀。如果要做不同的退火溫度需要多次運(yùn)行。主要是做簡(jiǎn)單的,對(duì)目的基因退火溫度的擴(kuò)增。該儀器主要應(yīng)用于科研研究,教學(xué),醫(yī)學(xué)臨床,檢驗(yàn)檢疫等機(jī)構(gòu)。
    把一次性二手熱循環(huán)儀PCR儀R擴(kuò)增可以設(shè)置一系列不同的退火溫度條件(溫度梯度),通常有12種溫度梯度,這樣的儀器就叫梯度PCR儀。因?yàn)楸粩U(kuò)增的不同DNA片段,其zui適退火溫度是不同的,通過(guò)設(shè)置一系列的梯度退火溫度進(jìn)行擴(kuò)增,從而一次性二手熱循環(huán)儀PCR儀擴(kuò)增,就可以篩選出表達(dá)量高的zui適退火溫度,進(jìn)行有效的擴(kuò)增。主要用于研究未知DNA退火溫度的擴(kuò)增,這樣節(jié)約成本的同時(shí)也節(jié)約了時(shí)間。主要用于科研,教學(xué)機(jī)構(gòu)。梯度PCR儀,在不設(shè)置梯度的情況下也可以做普通PCR擴(kuò)增。具有雙槽梯度的不多,領(lǐng)成具備此功能。

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