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DNA合成儀的使用方法

閱讀:1604      發布時間:2016-8-18
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        DNA合成儀的使用方法
  
  亞磷酰胺寡核苷酸合成為例介紹該類儀器的一般操作步驟。亞磷酰胺DNA合成的試劑有:保護堿基的5/—DMT,A、G、C、T亞磷酰胺單體,四唑偶聯催化劑,乙酐,N—甲基咪唑封閉試劑,三氯乙酸(TCA)脫保護溶液,12氧化混合物,乙腈清洗溶劑,氨水切除溶液。使用步驟如下:
  
  1)仔細檢查合成儀上所有試劑瓶中的試劑量,必要時換掉試劑瓶,特別注意乙腈的量,因為該溶劑用量較大。
  
  2)將標記好的清潔的收集瓶裝在合成儀上。
  
  3)將要合成的DNA序列輸入合成儀。
  
  4)檢查選擇的合成步驟是否正確。
  
  5)選擇結束方法:TritylOffAuto是儀器的原始狀態,若打算以5,—DMT基團連接純化寡核苷酸,將其轉變為TritylOnAuto結束狀態。
  
  6)選擇結束方法,一般為系統的原始狀態。
  
  7)在每個柱監視器的Username下,輸入你所希望的保存名字。
  
  8)以代碼代替相應的DNA序列標記每一個收集瓶。
  
  9)打印出每一個柱設置的詳細資料。
  
  10)檢查打印出來的資料是否正確。
  
  11)運行StartColumn步驟檢查每一個柱的位置,確保合成儀上合成柱處于正確的位置。
  
  12)檢查連接在合成儀上的溶劑殘留(廢液瓶)是否充滿。
  
  13)如果分部收集器用來收集每個DMT脫保護步驟的流出物,確保試管充分清潔干凈,并打開分部收集器,確保DMT廢液管路通向分部收集器。
  
  14)啟動循環,運行開始程序清洗試劑管路,除去原來的試劑。
  
  注意:TritylOnAuto表示在合成寡核苷酸的5’端核苷酸帶有一個DMT,并將其從固相載體上切下來,儲存在收集瓶中;TritylOffAuto表示在合成寡核苷酸的5,端核苷酸沒有保護基團,將其從固相載體上切下來,儲存在收集瓶中;TritylOnManual表示合成寡核苷酸的5’端核苷酸帶有一個DMT,寡核苷酸沒有從固相載體上切下來,而是保留在合成柱中;TritylOffManual表示在合成寡核苷酸的5,端核苷酸沒有保護基團,寡核苷酸沒有從固相載體上切下來,而是保留在合成柱中。

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