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                                       免疫學技術

免疫組化根據抗原抗體反應和化學顯色原理，組織切片或細胞標本中的抗原先和一抗結合，再利用一抗與標記生物素、熒光素等的二抗進行反應，前者再用標記辣根過氧化物酶（HRP）或堿性磷酸酶（AKP）等的抗生物素（如鏈霉親和素等）結合，后通過呈色反應或熒光來顯示細胞或組織中化學成分，在光學顯微鏡或熒光顯微鏡下可清晰看見細胞內發生的抗原抗體反應產物，從而能夠在細胞爬片或組織切片上原位確定某些化學成分的分布和含量。
免疫組化主要步驟
冰凍切片
1、將切好的冰凍切片，用4℃冷丙酮固定5～30min，PBS洗5～10min 3minX3
2、滴加0.3%TritonX-100，37℃孵育20～40min，PBS洗5～10min X3
 
免疫組化石蠟切片
1、將石蠟切片置于烤箱60℃1h，然后按常規脫蠟至水
2、滴加0.3%TritonX-100，37℃孵育20～40min，PBS洗5～10min X3
 
3、滴加3%H2O2，37℃孵育5～30min，PBS洗5～10min X3
4、滴加山羊血清封閉液，37℃孵育5～30min，傾去勿洗
5、滴加適當比例稀釋的一抗，4℃孵育
6、取出切片，室溫放置30～60min，PBS洗5～10min X3
7、滴加生物素化二抗，37℃20～40min，PBS洗5～10min  X3
8、滴加辣根酶標記鏈霉卵白素，37℃20～40min，PBS洗5～10min X3
9、配制DAB顯色液，37℃顯色10-30min，充分水洗
10、蘇木素復染，水洗返藍
11、酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片
客戶提供
① 組織：新鮮或固定（10%中性甲醛、4%多聚甲醛）組織樣本；
② 細胞：新鮮（大于10E6）或固定（10%中性甲醛、4%多聚甲醛）細胞樣本；
③ 切片：石蠟切片，冰凍切片以及細胞爬片，涂片；
④ 實驗材料：一抗；
 生物提供
① 染色后的切片；
② 電子圖片；
③ 實驗報告（材料、試劑、儀器、方法、數據分析、實驗結果）；

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