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上海申知心生物科技有限公司
主營產品： 高血脂癥動物模型,心血管疾病動物模型,缺血性心臟病動物模型 |
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Chip步驟
ChIP 實驗操作流程：
1 、樣品準備與交聯
細胞收集后，用37%的formaldehyde處理細胞，交聯核酸與DNA結合蛋白；
2. 超聲打斷染色質
裂解細胞，用Bioruptor將染色質超聲破碎成200－1000bp片斷；將片段分為兩份，一份用于免疫共沉淀，一份用于對照。
3 、免疫共沉淀 (IP)
取B步驟所得一份片斷與ChIP特異抗體結合進行免疫共沉淀，利用免疫磁珠法富集抗體復合物。
4 、解交聯及純化 DNA
將富集的DNA/蛋白復合物解交聯釋放DNA片段，并進行純化（IP DNA）；B步驟所得用于對照（Input DNA）的片斷作不進行IP實驗，但也要解交聯并純化。
5 、 DNA 段 PCR 擴增
針對ChIP DNA, Input DNA及對照DNA的目的片段設計特異性引物并進行熒光定量PCR擴增。
6 、結果分析
%Input=2(CtInput-CtChIP)×Fd×
Fold Enrichment = [%(ChIP/Input)] / [%( Negative control/Input)]
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