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TA克隆

TA克隆方法（TA Cloning）：把PCR片斷與一個具有3-T突出的載體DNA連接起來的方法。因為PCR反應中所適用的聚合酶具有末端轉移的活性，通常在3加上A。例如：Taq聚合酶同時具有的末端連接酶的功能，PCR反應時在每條PCR擴增產物的3端自動添加一個3-A突出端。只有用經過特殊處理的具有3-T突出末端的DNA的片斷才能通過T/A配對進行連接。

通過PCR的方法擴增目的基因片斷的過程中，由于往往不清楚目的基因的DNA序列，獲得的目的片斷通常需要通過的方法，重組到T-載體中，通過序列測定清楚DNA序列。由于在PCR過程中，使用的DNA聚合酶不同，往往分為2種情況：（1）使用不同的Taq酶，在PCR擴增循環結束后，加上72℃ 10分鐘一個過程，Taq酶可以在擴增產物的3末端加上A，因此PCR產物回收純化后可以和T載體直接連接。（2）使用高保真的DNA聚合酶，如pfu酶，由于其不能在擴增產物的3末端加上A，得到的DNA序列為鈍端，因此，需要在回收純化后進行加A的過程，通常是以PCR回收產物為模板，加上量的普通Taq酶和反應液，加入dATP（或dNTP），72℃10分鐘，然后將加A產物直接用于TA連接。

實驗材料要求：未純化的PCR產物及PCR電泳圖片，PCR擴增引物序列PCR擴增用酶，如果使用含3'→5'外切酶活性的聚合酶，請提供PCR引物，我們將重新擴增PCR產物以能進行操作。

服務說明 
1、PCR產物實驗中，PCR片段越大，難度越大；2、實驗中，我們使用的是大家常用 T載體作為標準T載體，如果對載體有特殊要求，請再實驗之前告知客戶服務人員。

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