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上海申知心生物科技有限公司
主營產品： 高血脂癥動物模型,心血管疾病動物模型,缺血性心臟病動物模型 |
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過表達慢病毒構建及包裝
慢病毒包裝
1 、 特點：
1.1 直接包裝成為假病毒顆粒，對分裂和非分裂細胞均有感染作用，適合RNAi研究和體內實驗中難于轉染的細胞 (比如神經元細胞、干細胞或其它原代細胞)。
1.2 可以通過簡單方式，在短時間內獲得穩定表達特定基因的多種細胞株。
1.3 可用于基因敲除、基因治療和轉基因動物研究。
1.4 無需轉染試劑，操作簡便。
1.5 可以根據客戶需要制備多種標記。
2 、 原理：
慢病毒（Lentivirus）是逆轉錄病毒的一種。構建的siRNA / miRNA慢病毒載體，與化學合成的siRNA和基于瞬時表達載體構建的普通siRNA載體相比，一方面可以擴增替代瞬時表達載體使用，另一方面，Lentivirus-siRNA克隆經過慢病毒包裝系統包裝后，可用于感染依靠傳統轉染試劑難于轉染的細胞系如原代細胞、懸浮細胞和處于非分裂狀態的細胞，并且在感染后可以整合到受感染細胞的基因組，進行長時間的穩定表達。
3 、 過表達慢病毒包裝簡要流程：
3.1 含有目的基因的慢病毒表達載體的構建和質粒純化提取。
注：客戶也可以提供構建好的重組慢病毒表達載體。
3.2 慢病毒表達載體與包裝系統共轉染病毒包裝細胞。
3.3 收集病毒液。
3.4 純化和濃縮病毒。
3.5 分裝、- 80 oC保存。
3.6 滴度測定及無菌檢測。
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