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上海申知心生物科技有限公司
主營產品： 高血脂癥動物模型,心血管疾病動物模型,缺血性心臟病動物模型 |
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2018-11-30 閱讀(2020)
(1)復制方法 健康大鼠，雌雄不限，體重為300～350g。
1)落體撞擊裝置
①有機玻璃管：長為2m、內徑為19mm、外徑為26mm的有機玻璃管，3點固定于墻上，其下端距地面15cm，以放海綿床和大鼠。并在管壁上每10cm鉆一直徑為5mm的小孔，對應兩排，以減少空氣阻力。
②打擊墊片：直徑為10mm、厚為3mm的圓形不銹鋼片，用以制作彌漫性軸突損傷模型，另一種在其不銹鋼墊片距中心2.5mm處鉆一直徑1.5mm的小孔，置入一不銹鋼圓柱，使之高出墊片平面3mm以制作彌漫性腦損傷同時合并局灶性腦損傷動物模型。
2)腦損傷的方法 大鼠經腹腔注射水合氯醛(按350～400mg/kg體重的劑量)或戊丨巴丨比丨妥丨鈉(按50～60mg/kg體重的劑量)麻醉。手術區域皮膚消毒，行氣管插管，呼吸機輔助呼吸。股動脈插管以記錄動脈壓，并監護心電、血壓、脈搏、呼吸等變化。將大鼠俯臥固定于一已知彈性系數的海綿床上，移至有機玻璃管下端，墊片正對有機玻璃管中央，有機玻璃管上方置一滑輪，在銅柱上端系一小繩，將滑輪調整至繩索跨過滑輪后銅柱處于有機玻璃管中央為止。待動物開始蘇醒，有肢體活動時，將400g重銅柱由1m高處自由墜落于不銹鋼墊片上，立即移開海綿床以免再次損傷，將大鼠移至手術臺上接呼吸機給以呼吸支持。觀察打擊中及打擊前后動物的呼吸、心率及血壓。記錄肢體活動、尿失禁、瞳孔改變及神經系統體征。敲擊后可選取3～24h間的時間段，快速斷頭取腦，記錄蛛網膜下腔出血及肉眼所見的腦挫傷情況。并將全腦浸泡于甲醛液中24h，固定好的腦作冠狀切片，層厚2mm HE染色。也可作心腦灌注，分別取左右頂葉皮層、海馬、胼胝體、腦干等組織，處理后超薄切片，進行電鏡觀察。
(2)模型特點 敲擊后動物的死亡率在25％左右。
1)一般癥狀 傷后動物表現為豎毛、尿失禁、四肢抽搐、單側或雙側瞳孔散大、呼吸抑制等癥狀。血壓立即出現平均動脈壓上升，然后是一段時間的低血壓，并在30～60min內恢復到傷前水平。心率迅速減慢，10～15min后逐步回升至傷前水平。
2)大體病理變化 創傷鼠均見明顯、廣泛的蛛網膜下腔出血，傷后3h胼胝體、小腦上臂、腦干等處可見散在的點片狀出血灶，呈現彌漫性的腦損傷。低倍鏡下HE染色后見有明顯的蛛網膜下腔出血，傷后1h腦干免疫組化染色切片上發現有數量的軸索腫脹變粗，同期HE染色未顯示軸索的變化；傷后3、6、12、24h鼠腦免疫組化染色顯示皮層下、胼胝體、腦干等處出現大量的軸索損傷的進一步改變，如分葉狀腫脹、內折以及軸索斷裂后形成的末梢球和回縮球。神經元胞體腫脹、胞核濃染、胞漿淺染、尼氏體減少。
3)電鏡觀察 可見索髓鞘出現分離腫脹、內折，軸索內神經微絲紊亂、橫斷面見微管減少。髓鞘纖維常呈節段性變性膨大，神經微絲排列混亂和變性融合，髓鞘板層松散洋蔥樣變。部分樹突也有不同程度的腫脹，透亮和空泡變，膠質細胞內可見線粒體腫脹，神經突觸前后膜明顯增厚。
(3)比較醫學 臨床上閉合性顱腦損傷主要表現為彌漫性的腦損傷，本模型模擬外力所致腦損傷的特點，給予一個外界定力敲擊，使得動物的主要生命指征均發生了明顯的變化。且廣泛的顱內出血，神經組織的大面積損傷，神經細胞的病理學改變等，均類似于人類閉合性顱腦損傷的彌漫性損傷的特征。而且一個固定的外力敲擊，動物的損傷程度相似，重復性好，利于損傷后病理演變過程的研究和治療結果的判斷。
