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　　1.限制缺陷型：外切酶和內切酶活性缺失，外源基因進入后可穩定存在。

 

　　2.感染缺陷型：防止重組細胞擴散污染。

 

　　3.重組整合缺陷型：外源基因進入后游離在染色體外，不會發生重組。

 

　　4.高轉化率：易接受外源核酸。

 

　　5.遺傳互補：與載體有選擇標記互補的表型，能夠篩選。

 

　　感覺態細胞的實驗步驟：

　?。?）感受態細胞的制備

　　1）挑取大腸桿菌劃線于LB平板上，在37℃恒溫培養過夜(16-18h)。

 

　　2）挑取單菌落于50mLLB培養基中37℃、200r/min培養3-4h，至出現薄霧狀菌懸液即可。

 

　　3）將培養液置于冰上預冷15min，并間斷輕輕搖動。

 

　　4）將冷卻的培養液倒入己在冰上預冷的50mL離心管中。

 

　　5）在冷凍離心機中離心，4℃3000r/min離心5min。

 

　　6）棄上清、加入15mL冰上預冷的0.1mol/LCaCl2溶液,輕輕旋轉，使細胞充分重新懸浮，冰上放置20-30min。

 

　　7）于4℃3000r/min離心5min。

 

　　8）棄上清，加入2mL冰上預冷的0.1mol/LCaCl2溶液，輕輕旋轉，使細胞充分重新懸浮，5min后就可以用于轉化實驗，或添加保護劑，低溫或超低溫冷凍貯藏備用。

 

　?。?）感覺態細胞的DNA轉化

　　1）將-80℃保存的細胞置于冰中融化10分鐘。

 

　　2）取細胞移至新的轉化管中。向細胞中加入0.1ng～10ng（3µl～10µl）的轉化用DNA，輕輕混勻后冰中放置30分鐘。

 

　　3）42℃水浴中放置45秒鐘后，立即于冰中放置1～2分鐘。

 

　　4）加入890µl37℃預溫的SOC培養基，在37℃200r/min振蕩培養50-60min,使細菌復蘇，抗性得以表達。

 

　　5）取100μL左右轉化液涂布在含有4μLIPTG，40μLx-ga1和氨芐青霉素(Amp50μg/mL)的平板上。

 

　　6）倒置平板于37℃培養16-18h，觀察實驗結果并記錄。