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公司免費提供電子版人白介素1(IL-1)elisa試劑盒說明

閱讀:798        發布時間:2015-4-28

人白介素1(IL-1)elisa試劑盒實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人白細胞介素1(IL-1)水平。用純化的人白細胞介素 1(IL-1)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入白細胞介素1(IL-1),再與HRP 標記的白細胞介素1(IL-1)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白細胞介素 1(IL-1)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人白細胞介素1(IL-1)濃度。

人白介素1(IL-1)elisa試劑盒操作步驟

1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

120 ng/L 5 號標準品 150μl 的原倍標準品加入 150μl 標準品稀釋液

60 ng/L 4 號標準品 150μl 的 5 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

30 ng/L 3 號標準品 150μl 的 4 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

15 ng/L 2 號標準品 150μl 的 3 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

7.5 ng/L 1 號標準品 150μl 的 2 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、

待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4. 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此

重復 5 次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同 3。

8. 洗滌:操作同 5。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15 分鐘.

10. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色) 。

11. 測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

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