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動物性食品中的氯霉素殘留測定

時間:2015-7-2閱讀:1354
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動物性食品中的氯霉素殘留測定

    酶標板的唯恐包被有偶聯抗原,當加入標準品貨待測樣品。再加入氯霉素抗體時,包被抗原與加入的標準品貨待測樣品競爭抗體,加入酶標記物,酶標記物與抗體結合。通過洗滌除去游離的抗原、抗體及抗原-抗體復合物。加入底物液,底物被結合到酶標板上的酶標記物催化而顯色,在45nm處測量吸光度值,與標準曲線與定量。在整個反應過程中,樣品中氯霉素含量越高,反應顯色就越濃,即氯霉素含量與吸光度值成反比。

動物性食品中的氯霉素殘留測定

儀器與試劑

儀器:

酶標儀;旋轉蒸發儀;組織勻漿器;冷凍離心機;振蕩器;氮吹儀。

試劑:所用試劑均為分析純;水位符合國標規定的二級水

乙酸乙酯、正乙烷、氯霉素ELISA試劑盒 2-8℃冰箱中保存。

實驗步驟:

樣品的提取;將蝦肉勻漿,4℃冷藏備用。;稱取制備好的對蝦樣品(3±0.03)g,置50ml離心管中,加入乙酸乙酯6ml振蕩10min,室溫3800r/min。吸取上層液4ml(約相當于2g樣本),50℃下氮氣吹干,加入正乙烷1ml溶解殘留物,再加緩沖液工作液1ml強烈振蕩1min,再次離心15min,取50ul用于分析。稀釋倍數為0.5倍。做空白對照。

試劑準備工作:從4℃冷藏環境中去除所需試劑,置室溫(20-25℃)平衡30min以上,每種液體試劑使用前均搖勻,。

洗滌液工作也 將濃縮洗滌液(20倍濃縮)40ml用水稀釋至800ml備用。

緩沖液工作液 將濃縮緩沖液(2倍濃縮)50ml用水稀釋至100ml備用。

氯霉素抗體工作液 用緩沖液工作液按1:10的比例稀釋氯霉素抗體濃縮液(如400ul濃縮液+4ml的緩沖液工作液,足夠4個唯恐板條32孔用)

測定: 

將鋁箔袋沿著外延剪開,去除需要數量的微孔板及框架,平衡至室溫。將樣品和標準品對應為空按序編號,每個樣品和標準品做2孔平行,并記錄標準孔和楊平孔所在的位置

加入標準品或處理好的試樣50ul到各自的為空中,然后加入氯霉素抗體工作液50ul,蓋板,輕輕振蕩混勻,室溫環境中反應1h。取出酶標板,將孔內液體甩干,于每孔中加入洗滌液工作液250ul,洗滌4-5次,用洗水紙排干。

每孔中計入酶標記物100ul,蓋板,室溫環境中反應30min。取出酶標板,將孔內液體甩干,每個為空中加入洗滌液工作液250ul,洗滌4-5次,用西都會紙拍干。

加入底物液A液50ul和底物液B液50ul到微孔中,輕輕振蕩混勻,室溫環境中避光顯色30min

加入終止液50ul到為空中,輕輕振蕩混勻,設定酶標儀于450nm處,測定每孔吸光度值。

結果計算

定性測定 示例:以0.45ug/l標準液的吸光度值為判斷標準,樣品吸光度值大于或等于該值為檢出,小于該值為可疑,建議用確定法確證。

定量測定  按一下公式計算吸光度值

相對吸光度值=B/B0*100%


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