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青島捷世康生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第12年

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果實(shí)中有機(jī)酸的測定-HPLC法

時(shí)間:2015-6-16閱讀:2819
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果實(shí)中有機(jī)酸的測定-HPLC法


    果實(shí)中的有機(jī)酸有草酸乙酸蘋果酸檸檬酸琥珀酸乳酸等。乳癰常規(guī)的酸堿滴定法,雖然可測出總算量,但對(duì)各成分酸的含量則無法確定,若采用液相色譜法(HPLC)則可解決此難題。

     液相蘇測有機(jī)酸是利用有機(jī)酸在化學(xué)合C18固定相與2%NH4H2PO4的流動(dòng)相分配系數(shù)之間的差異而進(jìn)行分離后,再經(jīng)紫外檢測器或示差吸光檢測器而檢出,定性可根據(jù)色譜曲線的保留時(shí)間,定量可根據(jù)色譜峰面積或峰高,利用外標(biāo)法計(jì)算而得。

試劑和儀器 夜宵液相色譜儀,告訴離心機(jī),0.45nm唯恐過濾膜,10ml進(jìn)樣器。NH4H2PO4496%乙醇,0.01mol/NaOH及200ppm標(biāo)準(zhǔn)有機(jī)酸.

試驗(yàn)步驟

1、樣品的處理 5-10g樣品用80%乙醇25ml于75℃水浴中提取15min,冷后離心,收集煽情也,沉淀10ml80%乙醇洗兩次,江上清液收集在一起,zui后用80%乙醇定容至50ml取5ml蒸發(fā)至干(在75℃下),殘?jiān)?ml流動(dòng)相溶解。共色譜測定用。

2、標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制  取200ppm的原液0.5、1、2、3、4ml,用流動(dòng)相稀釋至5ml混勻后共色譜測定用。

3、色譜測定

固定相:化學(xué)鍵合C18

流動(dòng)相:2.5%NH4H2PO6(PH=2.8)

流速:1ml/min

進(jìn)樣量10ul

檢測器:紫外檢測器(214nm),0.1AUFS

以峰高或峰面積做標(biāo)準(zhǔn)曲線,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查找出有機(jī)酸濃度求算出有機(jī)酸含量。

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