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藥物靶點開發與驗證淺談
相對于未知的藥物靶點來說，已知的藥物靶點只不過是冰山一角。如何能在眾多的未知里發現并找到有效的藥物靶點？靶點的選擇在整個藥物研發過程中起著至關重要的作用。現代藥物研究中，新靶點的建立往往是新藥創新的前提和保障。隨著現代分子生物學技術的發展和人類基因組計劃的完成，出現了大量可供治療干預的新型分子靶點，但并不是所有的靶點都能夠成為與疾病有關的有效靶點，因此對新型靶點進行開發和驗證便成為非常重要的工作。
據統計，除抗感染、抗病毒和抗寄生蟲類藥物以外，制藥工業用來作為藥物靶向篩選的靶標已有417種，包括受體、酶、離子通道等，藥物靶標大體涉及10個系統的功能和疾患：外周及中樞神經系統、內分泌、炎癥反應、血液及造血、癌瘤、心腎系統、胃腸系統、免疫調節、維生素缺乏、泌尿系統。到目前為止，已經有數千個靶點類蛋白被克隆純化，包括大約包括大約750個G-蛋白偶聯受體(GPCRs)、100多個配體門控性離子通道、60多個核受體、50多個細胞因子和大約20個具有重吸收和轉運功能的蛋白質。多種靶點識別方法得到的藥物作用靶點只能作為靶點初步篩選的方法，之后需要對候選靶點進行驗證。藥物靶點的開發和驗證需要許多生物技術作支撐：
基因水平的技術
高通量基因表達技術
cDNA過表達技術
基因敲除(Konck-out)技術
蛋白質水平技術
酵母雙雜交系統
蛋白質組學
基因水平技術靶點驗證示例：步就是確認此靶點在細胞實驗中是否調節化合物的生物活性。可以通過RNA干擾技術沉默某一疾病的基因，形成缺乏特定靶標的小鼠，將藥物注射到基因敲除的小鼠中，若藥物沒有引起效應，說明藥物是通過這一特定靶點作用的。除了RNA干擾技術，也可以用cDNA過表達來建立藥物-靶點作用關系，靶點的過表達可能會抑制藥物的活性。這種方法對于驗證膜靶點極為重要，一旦假定的靶點通過功能實驗的驗證，就需要對小分子物質及靶點的親和力進行量化。如果假定的靶點是一種酶，則要通過酶動力學實驗檢測此物質的酶活力。后還需要通過NMR等進行更嚴格的驗證，進而得到藥物-靶點復合物的三維結構。這些信息不僅可以驗證物理上的關聯性，也可以提供后期藥物優化中結合模型的鑒定標準。
盛世華康核心業務之一，就是致力于利用先進的技術方法幫助藥物研發企業識別和驗證已知或全新的藥物靶點。使客戶能夠對某個項目盡快做出評價和決策，從而有效的降低客戶在藥物研發項目上投入的資金和人力風險。涵蓋靶點篩選，新靶點細胞系的選擇，靶點的驗證及功能學實驗。
新靶點細胞系的選擇
通過qPCR和WB分別從mRNA水平和蛋白水平來考察不同待選細胞之間的差異。根據客戶的需要找到合適的細胞系開展實驗。
藥物靶點篩選
建立了藥物靶點篩選平臺，通過shRNA或sgRNA文庫的篩選，幫助客戶找到與潛在的多樣的藥物新靶點。并通過下游的靶點驗證進一步明確靶點的功能。
藥物靶點驗證
1.siRNA或者siRNA復合物介導靶基因的沉默
通過qPCR或WB技術分別驗證mRNA或蛋白水平的基因沉默；
通過細胞活力實驗或軟瓊脂克隆形成實驗分別檢測靶基因沉默對腫瘤細胞2D和3D生長水平的抑制作用；
2.shRNA介導的基因沉默
通過qPCR或WB技術分別驗證shRNA穩轉細胞株靶基因沉默效果；
細胞凋亡檢測；
研究信號通路和生物標志物檢測；
通過細胞活力實驗或軟瓊脂克隆形成實驗分別檢測靶基因沉默對腫瘤細胞2D和3D生長水平的抑制作用；