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上海乾思生物科技有限公司

凝膠遷移或電泳遷移率(EMSA)技術服務|實驗技術服務

時間:2015-9-1閱讀:92

關鍵詞:凝膠遷移或電泳遷移率(EMSA)技術服務|實驗技術服務
簡介:世界*品牌凝膠遷移或電泳遷移率(EMSA)技術服務|實驗技術服務原裝,質量保證,*。
凝膠遷移或電泳遷移率(EMSA)技術服務|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設計經驗及實驗操作技巧,承諾客戶不成功不收費。我們所有的實驗數據真實可信,我們提供原始的表達菌株和克隆質粒,客戶可以依據我們的實驗報告重復我們的實驗結果。
產品品牌:凝膠遷移或電泳遷移率(EMSA)技術服務|實驗技術服務   
測序實驗流程:
利用凝膠進行的電泳遷移率變動分析。不同大小的分子在凝膠中電泳移動的速度不同,當某種分子與另一種分子特異性結合后,它在非變性凝膠電泳帶中的位置就發生了變化,由此可以分析不同分子間的相互作用。如待檢測DNA樣品與核蛋白提取物孵育后進行電泳,如果核蛋白提取物中存在能與DNA特異結合的蛋白質,由于大分子復合體的形成,電泳時就出現遷移率降低,區帶滯后的現象。
1. 制膠 必須是非變性PAGE凝膠,我們實驗室一般用6.5%的非變性膠.制膠很重要,直接影響電泳的效果!一般控制在5分鐘凝固的效果.
10X TBE 1.0ml
40% Acrylamide(40%聚丙烯酰胺) 3.3ml
50% Glycerol(50%甘油) 1.0ml
dH2O(蒸餾水) 14.8ml
TEMED(四甲基乙二氨) 20μl
脫氣10min
10% AP(過硫酸氨) 120μl
總量 20.0ml
2. 一般試劑盒包括的試劑
l 10X Binding Buffer(10X 結合反應液)(-20 oC)
l Poly (dI:dC) (dI:dC)(聚核苷酸競爭物)(-20 oC)
l 6X Loading Buffer(10X 上樣緩沖液)(4 oC)
l Cold oligonucleotides(非標記競爭性寡核苷酸)(-20 oC)
l Biotin-Labeled Probe(生物素標記探針)(-20 oC)
l Streptavidin-HRP(鏈霉親核素-HRP)(4oC)
l 2×Blocking Buffer(2× 封閉液)(4 oC)
l 5×Washing Buffer(5× 洗滌液)(4 oC)
l Equilibration Solution(平衡液)(4 oC)
l Binding-membrane(結合反應膜)(RT)
3. 結合反應
每次結合反應需1-5μl核蛋白(根據核蛋白濃度而定),根據不同的核提取物濃度加入核提取物用量,用雙蒸蒸餾水將終體積調節到15μl
(1) 結合反應體系:
10X 結合反應液 1.5μl
Poly(dI:dC)(dI:dC) 1.0μl
細胞核提取物* ? μl
雙蒸水* ? μl
混勻室溫靜置20 分鐘
生物素標記的探針 0.5μl
總量 15μl
混勻室溫靜置20分鐘或以上。
(2)特異性反應確認競爭反應體系:
10X 結合反應液 1.5μl
Poly(dI:dC)(dI:dC) 1.0μl
細胞核提取物 ? μl
未標記的競爭性寡核 2.0μl
雙蒸水* ? μl
混勻室溫靜置20 分鐘
生物素標記的探針 0.5μl
總量 15μl
混勻室溫靜置20分鐘或以上。
其中:
探針用量: 這相當于10-50fmoles的DNA探針。我們通常是zui少50fmol.
蛋白樣品用量: 一般用量在2---20ug(控制在1-5μl)蛋白, 總體系15ul. 細胞核抽屜物濃度都比較低,組織的一般都比較高,因為雜蛋白較多.

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