關鍵詞:Western Blotting|實驗技術服務
簡介：世界*品牌Western Blotting|實驗技術服務原裝，質量保證,*。
Western Blotting|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設計經驗及實驗操作技巧，承諾客戶不成功不收費。在獲得重組蛋白產品的同時，我們也會提供相應的原始數據和原始圖片,不需要再額外花費精力重復實驗。另一方面，我們所有的實驗數據真實可信，我們提供原始的表達菌株和克隆質粒，客戶可以依據我們的實驗報告重復我們的實驗結果。
產品品牌：   http://www.。。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序實驗流程：
對于Western Blotting實驗而言，樣品處理是關鍵步驟之一，獲得的蛋白樣品必須均質、可溶，并解離成單個多肽亞基，且盡量減少相互間的聚集，使其zui終僅依賴本身的分子量大小進行分離。當目標蛋白的含量很低時，需要選取目標蛋白含量較高的組織或細胞器（如核抽提物），或者通過免疫沉淀等方式進行富集。通常樣品有重組蛋白、細胞和組織等。
1.樣品收集
1）培養的細胞
貼壁和懸浮細胞收集方式不同，細胞裂解液種類各異，推薦含SDS的凝膠加樣緩沖液裂解，煮沸即可。
2）動物組織
與細胞不同，組織塊由于體積較大，須預先經破碎勻漿處理。
2．樣品定量
樣品電泳前需測定蛋白濃度，以便保證上樣量一致，有利于后續定量或半定量分析。常用的蛋白質濃度測定方法有好多種，其靈敏度和所需時間不同，且不同的方法會受不同干擾物質的影響，實驗者可根據樣品制備方法（裂解液成分、去垢劑和還原劑種類等）自行選擇。
注意事項：
a. 應盡量避免引入影響后續定量的雜蛋白（如細胞培養液、蛋白酶抑制劑等）及其他干擾物質；
b. 樣品濃度應適中，1×SDS凝膠加樣緩沖液建議用量：貼壁細胞按10cm2培養皿/0.1ml，懸浮細胞按5×106細胞/0.1ml比例加入；
c. SDS對蛋白質變性和電泳分離至關重要，濃度應控制在2-10%之間，并根據具體需要調整；
d. 制備好的樣品可以在-20℃保存，但時間不宜過長，并避免反復凍融，否則蛋白會發生降解；
e. 內參對實驗結果至關重要，應選擇合適的內參。
Western印跡含一系列步驟，包括：
?? 用聚丙烯酰胺凝膠分離蛋白樣品。
?? 將膠上的蛋白轉移到膜上。
?? 鑒定膜上特定蛋白。
下面將從理論和實踐方面討論Western印跡方法。
用1-D或2-D凝膠分離復雜蛋白質混合物
印跡前分離復雜蛋白質混合物的zui常見方法是一維（1-D）SDS-PAGE電泳，它根據蛋白質的分子量進行分離。有時用非變性電泳分離天然蛋白質。盡管這種方法通常缺乏變性電泳的分辨率，但當蛋白須保留生物活性時非常有用。
二維（2-D）凝膠電泳用于分析細胞、組織、和體液蛋白質的組成，是現代蛋白質組學的關鍵技術。2-D免疫印跡可提供分子量和等電點信息，并可用于區分翻譯后修飾產生的不同蛋白質形式。有些情況下只進行1-D電泳分離也可用免疫印跡對蛋白分型。