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上海乾思生物科技有限公司

流式分選實驗服務|實驗技術服務

時間:2015-8-1閱讀:91

關鍵詞:流式分選實驗服務|實驗技術服務
簡介:世界*品牌流式分選實驗服務|實驗技術服務原裝,質量保證,*。
流式分選實驗服務|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設計經驗及實驗操作技巧,承諾客戶不成功不收費。我們所有的實驗數據真實可信,我們提供原始的表達菌株和克隆質粒,客戶可以依據我們的實驗報告重復我們的實驗結果。
產品品牌:   http://www.。。com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序實驗流程:
1 作用原理:
對實體組織分散的作用原理主要有3方面:① 可以破壞組織間的膠原纖維、彈性纖維等;②可以水解組織間的粘多糖等物質;③可以水解組織細胞間的緊密聯結裝置的蛋白質物質。酶消化法是實體瘤、培養細胞分散為單細胞的主要方法之一。常用的酶類試劑有:蛋白酶類——胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、鏈酶蛋白酶和中性蛋白酶等,都能解離組織中的細胞。胰蛋白酶能水解脂鍵和肽鍵;膠原酶能降解幾種分子類型的膠原;溶菌酶能水解糖蛋白和肽的糖苷鍵;彈性蛋白酶能消化連接組織的糖蛋白和彈性蛋白的纖維。不同酶對細胞內和細胞間不同組分有特異作用,可根據分散組織類型來確定使用的酶類。
2 注意事項:
① 酶需要溶解于適當的溶液中,而這些溶液不致于造成酶效價降低;②要注意酶的使用濃度和消化時間;③要注意酶活性的PH值。如胃蛋白酶在堿性環境中失去活性,胰蛋白酶在中性溶劑中活性不佳等;④ 要隨時注意影響酶活性的其它因素,如酶的生產批號等。
化學處理法是將組織細胞間起粘著作用的鈣鎂離子置換出來,從而使細胞分散開來。
試劑的配制
① 0.2%EDTA配制:稱EDTA 0.2g,加入Hankˊs液100ml,封裝高壓消毒。置0℃-4℃保存;
② 胰酶加EDTA配制:胰酶0.25g 加PBS(pH7.0)200ml,濃度0.125%,EDTA 0.2g加PBS(pH7.0)100ml,濃度0.2%。各取40ml混合,分裝置冰箱保存,用時過濾即可使用。
實驗方法
① 將組織切成薄片,置入試管中;
② 首先加入EDTA液5ml,室溫下0.5h,離心棄之;
③ 再加入胰酶-EDTA液5ml。在37℃恒溫水浴振蕩器內30min;
④ 用300目尼龍網過濾,離心沉淀1000prm,5min。再以生理鹽水洗2-3次;
⑤ 細胞固定或低溫保存備用。
機械法分散實體組織包括:用手術剪刀剪碎或者用鋒利的解剖刀剁碎組織,用勻漿器勻漿,再用細注射針頭抽吸細胞或用300目尼龍網濾出單細胞懸液;采用搓網法也能獲得大量細胞。機械法易造成細胞碎片和細胞團塊,所以機械法常與其它方法配合使用。
1 剪碎法:
① 將組織塊放入平皿中,加入少量生理鹽水;
② 用剪刀將組織剪至勻漿狀;
③ 加入10ml生理鹽水;
④ 用吸管吸取組織勻漿,先以100目尼龍網過濾到試管中;
⑤ 離心沉淀1000prm,3-5min,再用生理鹽水洗3遍,每次以低速(500-800prm)短時離心沉淀去除細胞碎片;
⑥ 以300目尼龍網濾去細胞團塊;
⑦ 細胞用固定液固定或低溫保存備用。
2 網搓法
① 將100目,300目尼龍網扎在小燒杯上;
② 把剪碎的的組織放在網上,以眼科鑷子輕輕搓組織塊,邊搓邊加生理鹽水沖洗,直到將組織搓完;
③ 收集細胞懸液,離心沉淀500-800prm,2分鐘;
④ 固定細胞或低溫保存備用。
3 研磨法
準備一只70ml研磨器。
① 先將組織剪成1-2mm3大小組織塊;
② 放入組織研磨器中加入1-2ml生理鹽水;
③ 轉動研棒,研至勻漿;
④ 加入10ml生理鹽水,沖洗研磨器;
⑤ 收集細胞懸液,并經300目尼龍網過濾,離心沉淀500-800 prm,1-2 min,再以生理鹽水洗3 遍,離心沉淀;
⑥ 固定或低溫保存細胞懸液,備用。

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