小麥粉中硫脲的測定

BJS201602

1. 范圍

本方法規定了小麥粉中硫脲含量的液相色譜測定方法。

本方法適用于小麥粉中硫脲含量的測定。

1. 原理

試樣經提取、過濾、濃縮后，采用配有二極管陣列檢測器或紫外檢測器的液相色譜儀檢測，外標法定量；陽性樣品需用質譜法進行定性確認。

1. 試劑和材料

注：水為GB/T 6682規定的一級水。

3.1 試劑

3.1.1乙腈（CH₃CN)：色譜純。

3.1.2乙醇（C₂H₅OH）：分析純。

3.1.3乙酸銨（CH₃COONH₄）：色譜純。

3.1.4甲酸（HCOOH）：色譜純。

3.2 標準品

硫脲標準樣品的分子式、相對分子量、CAS登錄號見表1，純度≥99%。

表1 硫脲標準樣品的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子量

3.3 標準溶液配制

3.3.1硫脲標準儲備液：稱取硫脲標準樣品（3.2）0.1 g（至0.000 1 g），用水溶解，并轉移至100 mL容量瓶中，定容至刻度，此溶液濃度為1 mg/mL。貯存于4℃冰箱中，有效期3個月。

3.3.2硫脲標準系列工作液：分別準確吸取不同體積的標準儲備液（3.3.1），用水將其稀釋成硫脲含量分別為0.0 μg/mL、1.0 μg/mL、2.0 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL、20.0 μg/mL的標準系列工作液。臨用時配制。

3.4乙酸銨水溶液（25 mmol/L，含0.15%甲酸）：稱取1.925 g乙酸銨（3.1.3），加水溶解，加1.5 mL甲酸（3.1.4），定容至1 000 mL，經微孔濾膜（3.5）過濾，待用。

3.5微孔濾膜：0.45 µm，有機相。

1. 儀器和設備

4.1 液相色譜儀：配有二極管陣列檢測器或紫外檢測器。

4.2 超聲波清洗器。

4.3 渦旋混合儀。

4.4 分析天平：感量分別為0.01 g和0.000 1 g。

4.5 旋轉蒸發儀。

4.6 離心機：轉速≥8 000 r/min。

1. 分析步驟

5.1 試樣制備

準確稱取2 g試樣（至0.01 g）于25 mL具塞刻度試管中，加入5 mL水渦旋混勻，超聲5 min，加入乙醇（3.1.2）20 mL，混勻，超聲20 min后，用乙醇定容至刻度，濾紙過濾（如樣品渾濁或過濾較慢時，8 000 r/min離心5 min），取上層清液10 mL，旋轉蒸發至干，用2 mL流動相（5.2.2）溶液復溶，再經微孔濾膜（3.5）過濾，濾液進液相色譜儀分析。

5.2 儀器參考條件

5.2.1色譜柱：HILIC柱，250 mm×4.6 mm（i.d.），5 μm，或性能相當者。

5.2.2流動相：乙腈（3.1.1）+水，（90+10，v/v）。

5.2.3流速：1.0 mL/min。

5.2.4柱溫：25℃。

5.2.5檢測波長：246 nm。

5.2.6進樣量：5 μL。

5.3 標準曲線的制作

將標準系列工作液（3.3.2）分別按液相色譜參考條件（5.2）進行測定，得到相應的硫脲標準溶液的色譜峰面積，以標準工作液的濃度為橫坐標，以色譜峰的峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。

5.4 試樣溶液的測定

將試樣溶液（5.1）按液相色譜參考條件（5.2）進行測定，得到相應的樣品溶液硫脲的色譜峰面積，根據標準曲線得到待測液中硫脲的濃度，平行測定次數不少于兩次。

硫脲的標準液相色譜圖參見附錄A的圖A.1。

5.5 定性確認

如果試樣中的色譜峰保留時間與標準品一致，則可初步確認試樣中存在被測物質硫脲，陽性試樣需用質譜法進行確認試驗。

5.5.1 色譜條件

a）色譜柱：HILIC Silica色譜柱，100 mm×2.1 mm（i.d.），3 μm，或性能相當者。

b）流動相：流動相A：乙腈（3.1.1），流動相B：乙酸銨水溶液（3.4），梯度洗脫條件見表2。

表2梯度洗脫條件

c）流速：0.2 mL/min。

d）進樣量：5 μL。

e）柱溫：25℃。

5.5.2 質譜條件

a）電離方式：電噴霧正離子模式。

b）檢測方式：多反應檢測（MRM）。

c）霧化氣壓力：275.8 kPa。

d）干燥氣溫度：340℃。

e）干燥氣流速：10 L/min。

f）定性離子對、定量離子、碎裂電壓和碰撞能量見表3。

表3 硫脲的定性離子對、定量離子、碎裂電壓和碰撞能量

* ：定量離子

5.5.3 定性判定

按照上述條件測定試樣和標準工作溶液，如果試樣中的質量色譜峰保留時間與標準工作溶液一致（變化范圍在±2.5%之內）；試樣中目標化合物的兩個子離子的相對豐度與濃度相當標準溶液的相對豐度一致，相對豐度偏差不超過表4規定的范圍，則可判定為試樣中存在硫脲。

表4 定性確證時相對離子豐度的zui大允許偏差

1. 結果計算

試樣中硫脲含量按式（1）計算：

…………………………………………（1）

式中：

X—試樣中硫脲的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；

C—由標準曲線得出的樣液中硫脲的濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；

V₁—試樣提取過程中定容體積，單位為毫升（mL）；

V₂—試樣提取后取上清液體積，單位為毫升（mL）；

V₃—試樣濃縮后復溶體積，單位為毫升（mL）；

m—試樣稱取的質量，單位為克（g）；

計算結果以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示，結果保留三位有效數字。

1. 精密度

在重復條件下獲得的兩次獨立測定結果的差值不得超過算術平均值的10%。

1. 其他

當稱樣量為2.00 g時，本方法檢出限為2 mg/kg，定量限為5 mg/kg。

附錄A

硫脲的液相色譜圖

圖A.1硫脲的液相色譜圖