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脫氫抗壞血酸還原酶(DHAR)活性檢測試劑盒

脫氫抗壞血酸還原酶（DHAR）活性測定試劑盒說明書
微量法
注意：正式測定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
貨號(hào): BC0665
規(guī)格: 100T/48S
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體 110 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 20 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前加入 3mL 蒸餾水充分溶解。
試劑三：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前加入 3.5 mL 蒸餾水充分溶解。
試劑四：液體 8 mL×1 瓶，4℃避光保存。
標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑 10 mg×1 支，4℃避光保存。臨用前加入 1 mL 蒸餾水，配制成 10 mg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

產(chǎn)品簡介：
脫氫抗壞血酸還原酶（Dehydroascorbate reductase，DHAR）是植物體內(nèi)一種重要的抗氧化酶，是抗壞血酸-谷胱甘肽氧化循環(huán)中促進(jìn)抗壞血酸再生的關(guān)鍵酶。DHAR 在循環(huán)中利用抗壞血酸維持植物體內(nèi)抗壞血酸的正常代謝水平，保護(hù)細(xì)胞組分抵御氧化損傷方面發(fā)揮著重要作用。DHAR 催化還原性谷胱甘肽（GSH）還原脫氫抗壞血酸（DHA）生成 AsA，GSH 能和 5,5’-二硫代-雙-（2-硝基苯甲酸）（DTNB）反應(yīng)產(chǎn)生 2-硝基-5-巰基苯甲酸（TNB）和谷胱甘肽二硫化物（GSSG）。TNB 在波長 412 nm 處具有大光吸收。通過測定 GSH 的減少速率，計(jì)算 DHAR 活性。

自備儀器和用品：
研缽/勻漿器、冰、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、微量玻璃比色皿/96 孔板、可調(diào)式移液器和蒸餾水。 

操作步驟：
一、樣品的處理
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）: 提取液體積（mL）1 : 5-10 的比例（建議稱取約 0.1 g 組織，加提取液 1 mL），冰上充分研磨勻漿，8000 g，4℃ 離心 10 min，取上清液置于冰上待測。
2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為 500-1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)胞加入 1 mL 提取液），冰浴超聲超聲破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3s，間隔 7s，總時(shí)間 3 min）；然后 8000 g，4℃，離心 10 min，取上清置于冰上待測。
3. 血清等液體：直接檢測。

二、DHAR 測定操作：
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長到 412 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：將 10 mg/mL 標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水稀釋為 0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.0015625mg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。

脫氫抗壞血酸還原酶(DHAR)活性檢測試劑盒