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BC0545-丙酮酸激酶(PK)活性檢測試劑盒
  • BC0545-丙酮酸激酶(PK)活性檢測試劑盒
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貨物所在地:北京北京市

地: 北京

更新時間:2025-03-23 21:00:07

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丙酮酸激酶(PK)活性檢測試劑盒
測定意義:PK(EC 2.7.1.40)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,催化糖酵解過程中的后一步反應,是糖酵解過程中的主要限速酶之一,也是產生ATP的關鍵酶之一,因此測定PK活性具有重要意義。
測定原理:PK催化磷酸烯醇式丙酮酸和ADP生成ATP和丙酮酸,乳酸脫氫酶進一步催化NADH和丙酮酸生成乳酸和NAD+,在340nm下測定NADH下降速率

丙酮酸激酶(PK)活性檢測試劑盒

操作步驟:

一、樣本的前處理

1、細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(10 4個)提取液體積(mL)為 500-1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 20%或者 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次);8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

2、組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5-10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液),進行冰浴勻漿;8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

3、血清(漿)樣品:直接檢測。

二、測定步驟及加樣表:

1. 分光光度計預熱 30min 以上,調節波長 340nm,蒸餾水調零。

2. 樣本測定

(1) 在試劑二瓶中加入 17ml 試劑一和 1ml 蒸餾水充分溶解,置于 37℃(哺乳動物)或 25℃ (其他物種)水浴 5 分鐘,現配現用。

(2) 在試劑三中加入 1ml 蒸餾水充分溶解,冰上放置備用,現配現用。

(3) 在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 樣本、10μL 試劑三和 180μL 試劑二,混勻,立即記錄 340nm 處 20s 時的吸光值 A1 和 2min20s 后的吸光值 A2,計算△A=A1-A2.

丙酮酸激酶(PK)活性檢測試劑盒

PK 活性計算: A.用微量石英比色皿測定的計算公式如下:

1、 血清(漿)PK 活力的計算:單位的定義:每毫升血清(漿)每分鐘消耗 1nmolNADH 定義為一個酶活力單位。 PK(U/mL)=[△A×V 反總÷(ε×d)×10 9] ÷V 樣÷T=1608×△A

2、 組織、細菌或細胞中 PK 活力的計算:

(1) 按樣本蛋白濃度計算:單位的定義:每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1nmolNADH 定義為一個酶活力單位。 PK(U/mg prot)=[△A×V 反總÷(ε×d)×10 9] ÷(Cpr×V 樣)÷T=1608×△A ÷Cpr

(2) 按樣本鮮重計算單位的定義:每 g 組織每分鐘消耗 1nmolNADH 定義為一個酶活力單位。 PK(U/g 鮮重)=[△A×V 反總÷(ε×d)×10 9] ÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T=1608×△A ÷W

(3) 按細菌或細胞密度計算單位的定義:每 1 萬個細菌或細胞在反應體系中每分鐘消耗 1nmolNADH 定義為一個酶活力單位。 PK(U/10 4 cell)=[△A×V 反總÷(ε×d)×10 9] ÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=3.216×△A V 反總:反應體系總體積,2×10 -4L;ε:NADPH 摩爾消光系數,6.22×10 3L/mol/cm;d:比色皿光徑, 1 cm;V 樣:加入樣本體積,0.01mL;V 樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應時間,2min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;500:細菌或細胞總數,500 萬。

B.用 96 孔板測定的計算公式如下:

1、 血清(漿)PK 活力的計算:單位的定義:每毫升血清(漿)每分鐘消耗 1nmolNADH 定義為一個酶活力單位。 PK(U/mL)=[△A×V 反總÷(ε×d)×10 9] ÷V 樣÷T=3216×△A 2、 組織、細菌或細胞中 PK 活力的計算:

(1) 按樣本蛋白濃度計算:單位的定義:每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1nmolNADH 定義為一個酶活力單位。 PK(U/mg prot)=[△A×V 反總÷(ε×d)×10 9] ÷(Cpr×V 樣)÷T=3216×△A ÷Cpr

(2) 按樣本鮮重計算單位的定義:每 g 組織每分鐘消耗 1nmolNADH 定義為一個酶活力單位。 PK(U/g 鮮重)=[△A×V 反總÷(ε×d)×10 9] ÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T=3216×△A ÷W

(3) 按細菌或細胞密度計算單位的定義:每 1 萬個細菌或細胞在反應體系中每分鐘消耗 1nmolNADH 定義為一個酶活力單位。 PK(U/10 4 cell)=[△A×V 反總÷(ε×d)×10 9] ÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=6.432×△A V 反總:反應體系總體積,2×10 -4L;ε:NADPH 摩爾消光系數,6.22×10 3L/mol/cm;d:96 孔板光徑,0.5cm;V 樣:加入樣本體積,0.01mL;V 樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應時間,2min; Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;500:細菌或細胞總數,500 萬。

丙酮酸激酶(PK)活性檢測試劑盒

提取液:100mL×1 瓶,4℃保存;試劑一:液體 20 mL×1 瓶,4℃保存;試劑二:粉劑×1 支,-20℃保存;試劑三:液體×1 支,4℃保存;

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