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BC0325-植物中脂氧合酶 (LOX)活性檢測試劑盒
  • BC0325-植物中脂氧合酶 (LOX)活性檢測試劑盒
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貨物所在地:北京北京市

地: 北京

更新時間:2025-03-23 21:00:07

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植物中脂氧合酶 (LOX)活性檢測試劑盒
測定意義:LOX廣泛存在于植物組織中,催化不飽和脂肪酸氧化反應(yīng),導(dǎo)致膜脂過氧化。在植物的生長發(fā)育、成熟衰老及逆境脅迫過程中具有重要作用。
測定原理:LOX催化亞油酸氧化,氧化產(chǎn)物在234nm處有特征吸收峰;測定234nm吸光度增加速率,來計算LOX活性。

植物中脂氧合酶 (LOX)活性檢測試劑盒

LOX 廣泛存在于植物組織中,催化不飽和脂肪酸氧化反應(yīng),導(dǎo)致膜脂過氧化。在植物的生長發(fā)育、成熟衰老及逆境脅迫過程中具有重要作用。 LOX 催化亞油酸氧化,氧化產(chǎn)物在 234nm 處有特征吸收峰;測定 234nm 吸光度增加速率,來計算 LOX 活性。

植物中脂氧合酶 (LOX)活性檢測試劑盒

一、粗酶液提取:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿。16000g,4℃離心 20min,取上清置冰上待測。二、測定: 1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min 以上,調(diào)節(jié)波長到 234 nm,蒸餾水調(diào)零。 2. 試劑二在 25℃水浴中預(yù)熱 30 min 以上。 3. 空白管:依次在微量石英比色皿/96 孔板中加入 20μL 蒸餾水、160μL 試劑二和 20μL 試劑三,迅速混勻后于 234nm 比色,記錄 15s 和 75s 的吸光值,分別記為 A1 和 A2。 4. 測定管:依次在微量石英比色皿/96 孔板中加入 20μL 上清液、160μL 試劑二和 20μL 試劑三,迅速混勻后于 234nm 比色,記錄 15s 和 75s 的吸光值,分別記為 A3 和 A4。三、LOX 活性計算: a. 使用微量石英比色皿測定的計算公式如下(1) 按照蛋白濃度計算活性單位定義:25℃中每毫克蛋白每分鐘催化吸光值變化 0.001 個單位為 1 個酶活單位。 LOX (U/mg prot) = [(A4-A3)-(A2-A1)]×V 反總÷(Cpr×V 樣)÷T×1000 = 10000×[(A4-A3)-(A2-A1)]÷Cpr Solarbio Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd /82 Http://www.solarbio。。com 第 2頁,共 2 頁(2) 按照樣本質(zhì)量計算活性單位定義:25℃中每克組織每分鐘催化吸光值變化 0.001 個單位為 1 個酶活單位。 LOX (U/g) = [(A4-A3)-(A2-A1)]×V 反總÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T×1000 = 10000×[(A4-A3)-(A2-A1)]÷W Cpr:上清液蛋白濃度,mg/mL,需另外測定,建議使用本公司 BCA 蛋白質(zhì)含量測定試劑盒; V 反總:反應(yīng)體系總體積,200μL=2×10-4L;V 樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,20μL=0.02mL;W :樣品質(zhì)量,g;V 樣總:上清液總體積,1mL;T:反應(yīng)時間。 b. 使用 96 孔板測定的計算公式如下(1) 按照蛋白濃度計算 活性單位定義:25℃中每毫克蛋白每分鐘催化吸光值變化 0.001 個單位為 1 個酶活單位。 LOX (U/mg prot) = [(A4-A3)-(A2-A1)]×V 反總÷(Cpr×V 樣)÷T×1000 = 10 000×[(A4-A3)-(A2-A1)]÷Cpr (2) 按照樣本質(zhì)量計算 活性單位定義:25℃中每克組織每分鐘催化吸光值變化 0.001 個單位為 1 個酶活單位。 LOX (U/g) = [(A4-A3)-(A2-A1)]×V 反總÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T×1000 = 10 000×[(A4-A3)-(A2-A1)]÷W Cpr:上清液蛋白濃度,mg/mL,需另外測定,建議使用本公司 BCA 蛋白質(zhì)含量測定試劑盒; V 反總:反應(yīng)體系總體積,200μL=2×10 -4L;V 樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,20μL=0.02mL;W :樣品質(zhì)量,g;V 樣總:上清液總體積,1mL;T:反應(yīng)時間。

植物中脂氧合酶 (LOX)活性檢測試劑盒

試劑一:液體×1 瓶,4℃保存。試劑二:液體×1 瓶,4℃保存。試劑三:粉劑×1 瓶,4℃保存。臨用前加入 2mL 試劑二,充分溶解。

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