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脯氨酸(PRO)含量檢測試劑盒（微量法）說明書
貨號:BC0255
規格: 100T/96S
脯氨酸(PRO)含量檢測試劑盒（微量法）?產品簡介：
HYP是機體膠原蛋白主要成分之一，膠原蛋白大多分布于皮膚、腱、軟骨和血管等，因此HYP含量是反映膠原組織代謝及纖維化程度的一項重要指標。
樣品經水解產生游離的HYP，進一補被氯胺T氧化，氧化產物與對二甲氨基苯甲醛反應，產生紅色化合物，在560nm處有特征吸收峰。通過測定樣品水解液560nm吸光值，可計算HYP含量。
產品內容：
組織提取液：6mol/L鹽酸，自備。濃鹽酸：H2O（V/V）= 1:1，室溫保存；
細胞提取液：液體100mL×1 瓶，4 ℃保存；
試劑一：液體10mL×1 瓶，4 ℃避光保存；
試劑二：液體10mL×1 瓶，4 ℃避光保存。
脯氨酸(PRO)含量檢測試劑盒（微量法）操作步驟：
一、羥脯氨酸提取：
1. 組織：取約0.2g 樣品于玻璃管，加入2mL的組提取液，置于110℃烘箱，水解612小時，16000rpm，25℃，離心20min，用提取液定容2mL，取上清待測。
2. 細胞：取約500 萬個細胞，加入1mL 的細胞提取液，于高壓消毒器中15 磅保持30min，自然降壓后待測。
二、測定操作：
| 對照管 | 測定管 |
樣本（uL） |
| 60 |
試劑一（uL） | 60 | 60 |
混勻，室溫靜置20min | ||
試劑二（uL） | 60 | 60 |
H2O（uL） | 180 | 120 |
混勻，60℃，20min，取出后室溫靜置15 min，測定A560。(A560=A測定-A對照) | ||
羥脯氨酸含量計算：
用微量比色皿測定的計算公式:
標準曲線：y=64.875x+ 0.0251，R2=0.9991
（1）按組織計算
HYP含量（mg/g） =（A560-0.0251）÷64.875×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)
=0.154×（A560-0.0251）÷W
（3）按細胞計算：
HYP含量（mg/104cell)= （A560-0.0251）÷64.875×V 反總÷V 樣×V 樣總÷細胞數量（萬個）
=0.077×（A560-0.0251）÷細胞數量（萬個）
V反總：反應體系總體積，0.3mL； V樣：反應中樣本體積，0.06mL；V樣總：加入提取液體積，mL； W：樣本質量，g。
用96孔板測定的計算公式如下:
標準曲線：y=32.4375x+ 0.0251，R2=0.9991
（1）按組織計算
HYP含量（mg/g） =（A560-0.0251）÷32.4375×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)
=0.308×（A560-0.0251）÷W
（3）按細胞計算：
HYP含量（mg/104cell)= （A560-0.0251）÷32.4375×V 反總÷V 樣×V 樣總÷細胞數量（萬個）
=0.154×（A560-0.0251）÷細胞數量（萬個）
V反總：反應體系總體積，0.3mL； V樣：反應中樣本體積，0.06mL；V樣總：加入提取液體積，mL； W：樣本質量，g。
注意事項：
1、OD值大于0.8，樣品適當稀釋再測定，注意計算公式里乘以稀釋倍數。
2、試劑有一定的毒性，請操作時做好防護措施，防止吸入或與皮膚接觸。
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