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C1200-10-*0感受態細胞
  • C1200-10-*0感受態細胞
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貨物所在地:北京北京市

地: 北京市通州區馬駒橋聯東U谷中區

更新時間:2025-02-13 21:00:07

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*0感受態細胞保存: 所有受體菌均為甘油保存,-70℃可長期保存,-20℃可保存一年。感受態為-70℃保存,運輸均為干冰。

本公司生產的*0感受態細胞是采用大腸桿菌*0菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞,可用于DNA的化學轉化。使用pUC19質粒檢測,轉化效率可達108,-70℃保存六個月轉化效率不發生改變。

基因型:F_ mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15△lacⅩ74 recA1 deoR araD139Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL (StrR) endA1 nupG

*0感受態細胞 :一種用于鋪制與培養質粒平板和粘粒平板的重級缺陷的抑制型菌株。其中φ80 lacZΔM15基因的產物可與pUC載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實現α-互補,可用于藍白斑篩選。該菌株適用于高效的DNA克隆和質粒擴增,能保證高拷貝質粒的穩定遺傳。

*0感受態細胞操作方法:(以下各步驟均為無菌操作)

1將感受態細胞置于冰上融化,以下實驗以100ul感受態細胞為例。

2、向感受態細胞懸液中加入需轉化的目的DNA,注意目的DNA的體積不要超過感受態細胞懸液體積的十分之一,輕輕旋轉離心管以混勻內容物,冰浴放置30分鐘。

3、將離心管置于42℃水浴中60-90秒,然后快速轉移到冰浴中放置2-3分鐘,注意不要搖動離心管。

4、向離心管中加入500ul無菌無抗的SOC或LB培養基,37℃ 180rpm振蕩培養1小時。目的是使質粒上相關的抗性標記基因表達,使菌體復蘇。

5、取適量已轉化的感受態細胞涂布含相應抗生素的SOC或LB平板,37℃倒置培養12-16小時。涂布用量可根據具體實驗來調整,如轉化的DNA總量較多,可取100ul左右的轉化產物涂板;反之,如轉化的DNA總量較少,可取200-300ul的轉化產物涂板。過多菌液可以抑制細菌生長。如果預計的克隆較少,可通過離心后吸除部分培養液,懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。涂布剩余的菌液可4℃保存,如果次日的轉化菌落數過少可以將剩下的菌液再涂布新的平板。

*0感受態細胞注意事項:

1、感受態細胞應保存在-70℃,不可反復凍融,否則其轉化效率將會降低。

2、實驗過程中應嚴格無菌操作,防止其它DNA或雜菌的污染,避免為以后的篩選、鑒定帶來影響。

3、轉化時,轉化效率與外源DNA的濃度在一定范圍內成正比,但當加入的外源DNA量過多或體積過大反而會降低轉化效率。轉化時DNA體積要小于感受態細胞體積的十分之一。

4、轉化率的計算:轉化率=產生菌落的總數/鋪板DNA總量。

5、為防止轉化實驗不成功,可以保留部分連接產物,以重新轉化,將損失降到低。

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