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將旋光儀電源插頭插入220V交流電源，并將接地腳可靠接地。打開旋光儀電源開關，這時鈉光燈應啟亮，需經5min鈉光燈預熱，使之發光穩定。打開旋光儀電源開關(若光源開關打開后，鈉光燈熄滅，則再將光源開關上下重復打開1到2次，使鈉光燈在直流下點亮，為正常)。打開測量開關，這時數碼管應有數字顯示。
將裝有蒸餾水或其他空白溶劑的試管放入樣品室，蓋上箱蓋，待示數穩定后，按旋光儀清零按鈕。試管中若有氣泡，應先讓氣泡浮在凸頸處。通光面兩端的霧狀水滴，應用軟布揩干。試管螺帽不宜旋得過緊，以免產生應為，影響讀數。試管安放時應注意標記的位置和方向。
取出試管，將待測樣品注入試管，按相同的位置和方向放入樣品室內，蓋好箱蓋。旋光儀數顯窗將顯示出該樣品的旋光度。逐次按下復測按鈕，重復讀幾次數，取平均值作為樣品的測定結果。如樣品超過測量范圍，旋光儀在±45處來回振蕩。此時，取出試管，打開箱蓋按箱內回零按鈕，儀器即自動轉回零位。
旋光儀使用完畢后，應依次關閉測量、光源、電源開關。鈉燈在直流供電系統出現故障不能使用時，旋光儀也可在鈉燈交流供電的情況下測試，但儀器的性能可能略有降低。當放入小角度樣品(小于0.5°)時，示數可能變化，這時只要按復測按鈕，就會出現新的數字。
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