成人做爰免费视频免费看_成人a级高清视频在线观看,成人a大片在线观看,成人a大片高清在线观看,成人av在线播放,一a一级片,一级黄 中国色 片,一级黄 色蝶 片,一级黄色 片生活片

您好, 歡迎來到化工儀器網

| 注冊| 產品展廳| 收藏該商鋪

15021010459

technology

首頁   >>   技術文章   >>   大腸桿菌蛋白表達感受態細胞的制備

上海華雅思創生物科技有限...

立即詢價

您提交后,專屬客服將第一時間為您服務

大腸桿菌蛋白表達感受態細胞的制備

閱讀:1018      發布時間:2022-5-6
分享:
大腸桿菌蛋白表達系統是目前應用*泛,也是實惠的蛋白表達系統。E. coli具有遺傳背景清楚、細胞增殖快、表達量高、穩定性好和抗污染能力強等特點,適用于多種屬蛋白的表達。本文主要講述了大腸桿菌蛋白表達實驗中感受態細胞制備實驗流程和原理。

圖片




01
感受態細胞的概念

COMPETENT
圖片

感受態,是指宿主細胞最容易接受外源基因并實現將其轉化的一種生理狀態,它是由受體菌的遺傳性狀所決定的,同時也受菌齡以及外界環境因子的影響, 比如Ca2+就可以大大促進轉化的作用。細胞的感受態一般出現在對數生長期,新鮮幼嫩的細胞是制備感受態細胞和進行成功轉化的關鍵。

圖片



02
感受態細胞制備的原理

制備感受態細胞的方法是用預冷的CaCl2處理對數生長期的細菌,即用低滲CaCl2溶液在低溫(0℃)時處理快速生長(進入對數生長期)的細菌,從而獲得感受態細胞。此時細胞膨脹成球形,外源DNA分子在低溫條件下易形成抗DNA酶的羥基-鈣磷酸復合物粘附在細胞表面,通過熱激處理促進細胞對外源DNA分子的吸收。轉化效率非常高。此方法的關鍵在于選用的細胞必須處于對數生長期,實驗操作必須在低溫無菌環境下進行。



03
大腸桿菌感受態細胞的制備實驗


01
實驗儀器及試劑
  • 儀器:超凈工作臺,搖床,高壓滅菌鍋,培養箱,制冰機,超低溫冰箱,離心機,接種環,試管,搖瓶(2L),平板,移液槍,槍頭,離心管(500mL),EP管(1.5mL),藍蓋瓶,泡沫箱

  • 試劑:CaCl2溶液:PIPES 1.51g,CaCl2•2H2O 4.41g,甘油 75ml,pH=7.0,定容至500ml。

LB培養基(固體、液體):Tryptone 1.00g,Yeast 0.50g,NaCl 1.00g,定容至100ml。(固體培養基加入1.5%的瓊脂)

抗性:卡那霉素,氨卞青霉素,氯霉素,四環素。

  • 材料:感受態菌株


02
實驗方法及操作步驟
  • 取-80℃凍存的感受態菌株,用接種環劃線分離接種于固體平板上(平板抗性根據感受態選擇),做好標記,倒置于37℃培養箱培養過夜。
  • 第二天,從平板上挑取單個菌落,接種至含有4ml LB培養液(抗性根據感受態選擇)的試管中,37℃,195rpm,震蕩培養過夜。次日取菌液4ml接種至含有400ml LB培養基(抗性根據感受態選擇)的2L搖瓶中,37℃,200rpm震蕩培養約2-3小時。
  • 當菌落OD600nm值達到0.3-0.5時,將搖瓶取出放置于冰上10-15min。在無菌條件下把菌液倒入500ml的預冷的離心管中,離心4℃,3000r,8min。
  • 棄去上清,加入約200ml的預冷的CaCl2溶液,吹打混勻,懸浮菌體,放入冰浴30min。
  • 離心4℃,3000r,8min,棄去上清,加入約8ml預冷的CaCl2溶液,重新懸浮菌體。
  • 將用CaCl2溶液處理后的菌體分裝于1.5ml的EP管中,每管110ul,保存于-80℃的超低溫冰箱中。



04
感受態細胞測試

隨機取1支本次制備的感受態細胞,轉化一個以前轉化成功的質粒,從轉化平板上的菌落數及表達鑒定的SDS-PAGE電泳圖(看是否出現其他的雜帶及蛋白表達情況)判斷感受態的效價。如果效價好,這批感受可以用;否則,要重新制備。


注意事項

圖片
1、每次取感受態細胞時,注意查看庫存,保證庫存不低于15支,少于15支時要及時制備。
1、菌株生長在對數時進行CaCl2處理。
2、全程操作要【低溫無菌】。
3、用CaCl2溶液懸浮菌體時要均勻,不要有塊狀。
4、常用感受態細胞的選擇抗性:BL21(DE3)無抗性;BL21 Codon plus(DE3)具有氯霉素抗性;OrigamiB(DE3)具有卡那霉素抗性,不能用于具有卡那霉素抗性質粒的表達;BL21(DE3)plysS具有氯霉素抗性;Rosetta(DE3)具有氯霉素抗性;Shuffle具有鏈霉素抗性或不用抗性。


會員登錄

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

標簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標簽最多10個字符)

常用:

提示

您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復您~
在線留言
主站蜘蛛池模板: 亚洲最大成人网色| 日本亲子乱子伦XXXX50路| 超碰caopro熟女m超碰分类| 美妇蜜汁耸动雪臀娇吟| 国产SUV精品一区二妻| 日本一级特黄大片欧美黑寡妇| 性一乱一搞一交一伦一性| 亚洲 欧美 清纯 校园 另类| 51吃瓜网今日吃瓜资源| www.黄色免费网站| 亚洲AV网站在线观看播放| 人人超人人超碰超国产| 中文字幕人妻被公喝醉在线| 中文字幕日韩在线女同| 精品欧美日韩在线| 最新在线黄色网址| 午夜理论片YY4399影院| 国产亚洲精品福利视频| 精品国产成人亚洲午夜福利| 国产精品视频一区二区猎奇| 又色又爽又黄的在线视频免费看| 亚洲一区二区三区四区五区黄| 欧美成人精品A片免费一区99| 久久婷婷国产综合日韩欧美| 永久免费看A片无码精品| 国产午夜手机精彩视频| 国产成人无码视频一区二区三区| 亚洲欧美中文字幕一区二区| 欧美亚洲国产综合| 欧美日韩精品在线视频播放| 国产亚洲精品久久久久久线投注| 久久免费看少妇高潮A片特无毒| 久久久99久久久国产精品| 国产午夜精品一区二区三区四区| 日韩 欧美 高清| 夜精品A片观看无码一区二区| jap60路熟mature乱子视频| 欧美激情 亚洲激情| 国产亚洲AV片在线观看16女人| 日本黄片在线视频| 亚洲精品久久久久久无码AV|