1、血清內源性物質
1)類風濕因子：血清中IgM、IgG型類風濕因子（RF）在ELISA試劑盒檢測中，可與ELISA試劑盒體系中的捕獲抗體及酶符號二抗的FC段直接結合，然后導致檢測OD值偏高。
2)補體：ELISA試劑盒體系中固相一抗和符號二抗過程中，抗體分子發作變構，其FC段的補體C1q分子結合位點被顯露出來，使C1q可以將二者連接起來，然后形成檢測OD值偏高。
3)嗜異性抗體:人類血清中含有能與嚙齒類動物結合的天然嗜異性抗體，可將ELISA試劑盒體系中一抗和二抗連接起來，也能形成檢測OD值偏高。
2、血清外源性物質
外源性物質常常是因為用于ELISA試劑盒測定的血標本的收集、儲存等不妥所形成的。如標本溶血、標本被細菌污染、標本儲存過久、標本凝聚不全和采血管中添加物等影響。
1)標本溶血
因為各種人為原因引起的標本溶血，均可因紅細胞損壞溶解時釋放出許多具有過氧化物酶活性的血紅蛋白，在以辣根過氧化物酶為符號的ELISA試劑盒測定中，會導致非特異性顯色，干擾測定作用。
2)標本受細菌污染：因菌體中或許含有內源性辣根過氧化物酶，因而，被細菌污染的標本同溶血標本相同，亦可發生非特異性顯色而干擾測定作用