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今年諾貝爾醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)授予美國科學(xué)家卡塔林·卡里科（Katalin Karikó）和德魯·魏斯曼（Drew Weissman），表彰他們?cè)诤塑諌A基修飾方面的發(fā)現(xiàn)，從而開發(fā)出有效的mRNA疫苗。mRNA疫苗作為一種新型疫苗，不僅在新冠中有突出的貢獻(xiàn)，同樣有益于其他疾病，尤其是傳染性疾病的預(yù)防上。小優(yōu)整理了二位科學(xué)家在近年來mRNA疫苗的開發(fā)中使用的關(guān)鍵試劑，讓大家有更好的選擇。

一、無內(nèi)毒素質(zhì)粒純化試劑盒
Drew Weissman在研究中一直選擇來自QIAGEN的Endofree plasmid kit，他關(guān)注于質(zhì)粒的產(chǎn)品、純度、內(nèi)毒素以及超螺旋占比，對(duì)后續(xù)的IVT效率有較大的影響，多次發(fā)表在Vaccine、Nature、Science Advances等雜質(zhì)中[1,2,3]。

二、病毒RNA純化試劑盒
QIAamp viral RNA mini kit為新冠研究中的明星試劑盒，被WHO和中國CDC推薦為病毒RNA純化的*選擇試劑，其DU特的回收柱有高達(dá)90%的回收率，同樣有96孔板高通量形式，適合多種的應(yīng)用場(chǎng)景[3]。

三、mRNA純化/回收試劑盒
作為mRNA疫苗生產(chǎn)的關(guān)鍵步驟之一，mRNA的加帽率較為重要，純化效率是mRNA疫苗中的關(guān)鍵一環(huán)，Katalin Karikó發(fā)表在Pharmaceutics雜志上題為 “Ribozyme Assays to Quantify the Capping Efficiency of In Vitro-Transcribed mRNA" 的一篇文章中，設(shè)計(jì)了一種核酶介導(dǎo)的加帽效率測(cè)定方法，經(jīng)過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，其加帽效率測(cè)定方法優(yōu)于傳統(tǒng)方法。使用了QIAGEN基于硅膠模柱分級(jí)純化方案，即QIAGEN RNeasy Mini kit。該試劑盒中的硅膠模純化柱可以在不同的緩沖液條件下，結(jié)合不同長(zhǎng)度的RNA片段。最后，將硅膠柱純化得到的短5'切割產(chǎn)物和核酶用21% PAGE+8M尿素或者LC-MS進(jìn)行定量分析和可視化，得出不同方法的結(jié)果比較。具體流程如下[4]。

四、蛋白純化試劑
QIAGEN的Ni產(chǎn)品一直備受青睞，2022年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)得主Carolyn R.Bertozzi，Morten Meldal 和K.Barry Sharpless也多次使用Ni-NTA產(chǎn)品，其四價(jià)螯合比Ni-IDA 3價(jià)螯合獲得的純化更高，一次純化即可得到95%純化蛋白，結(jié)合量克搞到50mg蛋白/mL樹脂。Drew Weissman同樣使用QIAGEN的Ni產(chǎn)品并發(fā)表在*雜質(zhì)上[5,6,7,8,9]。

優(yōu)寧維致力于提供mRNA完整解決方案，包括但不限于mRNA合成原材料、工具或定制mRNA、mRNA研究及QC的眾多產(chǎn)品。

參考文獻(xiàn)：
#1：Anti-PfGARP activates programmed cell death of parasites and reduces severe malaria
#2：Tick immunity using mRNA, DNA and protein-based Salp14 delivery strategies
#3：Immunogenicity and protective efficacy of SARS-CoV-2 mRNA vaccine encoding secreted non-stabilized spike in female mice
#4：Ribozyme Assays to Quantify the Capping Efficiency of In Vitro-Transcribed mRNA
#5：mRNA-LNP expressing PfCSP and Pfs25 vaccine candidates targeting infection and transmission of Plasmodium falciparum
#6：mRNA vaccination induces tick resistance and prevents transmission of the Lyme disease agent
#7：In vivo adenine base editing of PCSK9 in macaques reduces LDL cholesterol levels
#8：A Multi-Targeting, Nucleoside-Modified mRNA Influenza Virus Vaccine Provides Broad Protection in Mice
#9：SARS-CoV-2 mRNA Vaccines Foster Potent Antigen-Specific Germinal Center Responses Associated with Neutralizing Antibody Generation