隨著基因工程技術的發展,病毒載體在目的基因的導入和表達中得到了廣泛應用。由于其效率高、適用細胞種類多、瞬時表達等特點,已經廣泛應用于疫苗研發領域,對病毒顆粒數進行實時的檢測是工藝中的關鍵環節,病毒的定量檢測對于疫苗的指導研發和質量控制具有重要意義。
目前進行病毒定量的方法主要是實時熒光定量PCR方法(Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction , RT-qPCR),通過熒光定量的方法對模版拷貝數進行定量, 每個模板的Ct值與該模板起始拷貝數的對數存在線性關系,利用已知起始拷貝數的標準品可作出標準曲線,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析,從而反映完整病毒顆粒數。
實時熒光定量PCR法目前已經發展成為病毒定量檢測使用廣泛的技術之一,具有特異性好、靈敏度高、污染小等優勢。但實時熒光定量PCR法前期體系構建樣品制備繁瑣且不穩定,極占實驗員時間和精力的同時也影響定量結果。
睿科Vitae 100 全自動化PCR體系構建系統能夠實現體系構建流程自動化,移液準確且穩定,實驗結果滿足需求,解放雙手的同時保證了樣品檢測結果的可靠性。
整體實驗流程
病毒顆粒數檢測(qPCR)整體實驗流程
應用場景
睿科生化為某疫苗公司腺病毒顆粒數檢測提供自動化體系構建方案,具體方案如下:
實驗流程
疫苗公司腺病毒顆粒數檢測自動化體系構建流程
實驗結果
標準曲線圖
樣品擴增圖
標準曲線圖,根據主要Slope數值判斷曲線的點稀釋是否準確,結果顯示,與客戶手動操作的slope值(Slope=-3.376)一致,R2=0.999代表曲線偏離,標準曲線配置符合要求。
樣品擴增圖,底部ROX所在區域越集中,即體系分裝越準確。結果顯示,體系構建分裝準確,符合要求。
產品優勢
Vitae 100全自動PCR體系構建系統
1、機械臂定位準確到0.05mm,移液精確度CV≤2%,數據穩定可靠;
2、儀器能有效解決疫苗研發過程中,樣品檢測和產品放行人工操作不穩定的困境;
3、加樣過程自動化,體系構建全程用時25min,節省時間和人力;
4、配備紫外消毒燈和HEPA過濾裝置,保證操作安全性。
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