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導(dǎo)讀

“瘦肉精”屬于β-激動(dòng)劑類化合物，包括鹽酸克侖特羅、萊克多巴胺和沙丁胺醇等十幾種物質(zhì)，是一類動(dòng)物用藥的統(tǒng)稱。任何能夠促進(jìn)瘦肉生長、抑制動(dòng)物脂肪生長的物質(zhì)都可以叫做“瘦肉精”。瘦肉精在減少脂肪增加瘦肉方面的作用非常明顯，能讓豬的單位經(jīng)濟(jì)價(jià)值提升不少，但也存在引發(fā)心律不齊甚至是心臟病等極危險(xiǎn)性的副作用。近年來（2011年），因食用被“瘦肉精”污染的食物導(dǎo)致中毒事件屢有發(fā)生，且后果嚴(yán)重，引起了世界各國的高度重視。

檢驗(yàn)方法

睿科應(yīng)用方案

儀器與耗材

Fotector Plus高通量全自動(dòng)固相萃取儀；

Auto EVA 60全自動(dòng)平行濃縮儀；

Agilent 1290II/6470 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜

MCX固相萃取柱（RayCure，60mg/3mL）

試劑

乙酸乙酯、異丙醇、甲醇均為色譜純；甲酸、高氯酸、氨水、氫氧化鈉；β-鹽酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶。

0.2mol/L乙酸鈉緩沖液：稱取13.6g乙酸鈉，溶解于500ml水中，用適量乙酸調(diào)節(jié)pH至5.2。

標(biāo)準(zhǔn)品：萊克多巴胺鹽酸鹽，克倫特羅鹽酸鹽，沙丁胺醇，特布他林硫酸鹽，100ng/ml。

內(nèi)標(biāo)物：沙丁胺醇-D3，克倫特羅-D9，10ng/ml。 

酶解

準(zhǔn)確稱取5g經(jīng)搗碎的樣品于50mL離心管內(nèi)，加入0.2moL/L乙酸鈉溶液（pH=5.2）20mL，再加入β-鹽酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶100μL，漩渦混勻，于37℃下避光水浴水解12h。

 提取

添加1ml的內(nèi)標(biāo)工作液于待測(cè)樣品中，加蓋置于水平振蕩器震蕩15min，5000r/min高速離心10min，準(zhǔn)確取10mL上清液于另一50mL離心管中，用高氯酸調(diào)節(jié)PH至1.0±0.3，4000r/min離心5min，將上清液轉(zhuǎn)移至另一50mL離心管中，用10moL/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至11，加入4~5g氯化鈉，加入異丙醇：乙酸乙酯=6:4 15mL，充分提取，4000r/min離心5min，吸取全部有機(jī)相到睿科全自動(dòng)氮吹濃縮儀EVA-60plus 50℃下氮?dú)獯蹈桑尤?.2M乙酸銨溶液5mL溶解，超聲混勻，使殘?jiān)浞秩芙夂髠溆谩?/p>

 凈化

將MCX固相萃取柱安裝在Raykol Fotector Plus高通量全自動(dòng)固相萃取儀上，依次用甲醇3 mL、水3 mL活化。備用液全部過柱，用水2 mL、2%甲酸水2ml、甲醇2 mL依次淋洗，抽干，用5％氨水甲醇溶液2 mL洗脫，收集洗脫液，使用EVA-60plus全自動(dòng)氮吹濃縮儀于40℃水浴氮?dú)獯蹈桑?0％乙腈水溶液（含0.1%甲酸）1.0 mL溶解，濾過，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。固相萃取方法見圖。

Fotector Plus固相萃取方法

  液相條件

液相梯度洗脫條件

  質(zhì)譜儀器參數(shù)

  MAR參數(shù)

圖5 4種瘦肉精類MRM色譜圖

為了驗(yàn)證該方法的回收率，本實(shí)驗(yàn)分別在豬肉樣品中加入沙丁胺醇、萊克多巴胺、特布他林4種混合標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行加標(biāo)回收驗(yàn)證(n=3)，加標(biāo)水平為0.5ug/kg，數(shù)據(jù)如表-2所示。加標(biāo)回收率在87.8-112.4%之間，RSD值控制在10%以內(nèi)。說明該方法能夠很好地運(yùn)用于豬肉中瘦肉精殘留量的檢測(cè)。

表-2.豬肉樣品加標(biāo)回收率及RSD值

注：其中克倫特羅的內(nèi)標(biāo)為克倫特羅-D9；沙丁胺醇、特布他林與萊克多巴胺的內(nèi)標(biāo)為沙丁胺醇-D3。

本解決方案操作方便、提取和濃縮效率高、回收率好。符合GB/T 22286-2008《動(dòng)物源性食品中多種β-受體激動(dòng)劑殘留量的測(cè)定 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法》要求。

EVA 系列全自動(dòng)平行濃縮儀可以自動(dòng)完成樣品的濃縮，采用氮吹針追隨的方式使得濃縮進(jìn)程更快，并節(jié)省氮?dú)猓籉otector Plus高通量全自動(dòng)固相萃取儀采用全自動(dòng)操作，可以排除人員操作帶來的誤差，從活化到上樣、洗脫一步到位，六通道同時(shí)進(jìn)行；同時(shí)Fotector Plus能夠?qū)崿F(xiàn)高通量處理，多一天能夠處理180個(gè)樣品，省時(shí)省力，真正為批量檢測(cè)提供幫助。