Biocoat腫瘤侵襲系統
BD 產品貨號：354166, 354165
儲存和運輸：-20度儲存，干冰運輸。
使用指南:
BD BiocoatTM 腫瘤侵襲系統由包被Matrigel基質的特殊材質BD FluoroBlok 熒光屏蔽8.0μm PET膜的培養小室組合而成。BD BiocoatTM 腫瘤侵襲系統具有以下特點：提高腫瘤細胞侵襲實驗的通量；自動化非破壞式的熒光檢測；節約抗腫瘤轉移藥物篩選的時間和勞動力；高度可重復性：平均z’=0.7(24孔)；平均z’=0.66(96孔)；使用簡便：無需反復取液和操作，僅需加入細胞、標記物，然后直接讀板。
操作過程:
凍融
從-20℃冰箱中取出產品，使其自然升溫到室溫。取出培養板在細胞小室內加入到500μL 37℃預熱的PBS，37℃無CO2環境下孵育2小時。解凍后，小心去除小室內的培養基，避免破壞Matrigel基質膜。
BD鈣黃綠素Calcein AM熒光染色劑后標記法
細胞通過侵襲消化基質膜后遷移到下小室，采用熒光標記定量細胞。細胞的侵襲能力用終點計算法計算得到。對于采用實時動力曲線的計算，推薦使用前標記法。
2.1 如步驟1準備培養板。
2.2 胰酶消化細胞單層后制得細胞懸液，溶于無血清DMEM培養基，推薦濃度為5×104 cells/mL。
2.3 上小室中加入500μL細胞懸液（2×104 cells）。
2.4 通過進樣口在下小室中加入750μL誘導劑。
2.5 在37℃，5%CO2 條件下孵育培養板和對照板20-22小時（由細胞類型決定）。
2.6 孵育后，小心去除上小室中的培養基。避免破壞Matrigel基質膜。可以通過反扣住培養板，輕輕拍打，以使培養基的傾倒。
2.7 將培養小室轉移到另一塊24孔板中，該孔板含有0.5 mL每孔的4μg/mL 鈣黃綠素（溶于HBSS）。在37℃，5%CO2的環境下培養一小時。
3、DilC12（3）熒光染色劑預標記法
細胞接種于孔板之前先用染色劑標記，可用于均一化實驗，所產生的實時動力數據可揭示細胞通過基底膜侵襲的動力曲線，不需要分解和破壞各個時間點。
3.1如1.所示凍融。
3.2 10μg/mLDilC12(3)溶解于含10%FBS的DMEM中，37℃ 1小時標記單層細胞。
3.3 胰酶消化細胞單層，制備細胞懸液，溶于無血清DMEM培養基，濃度為1×105 cells/mL。
3.4 上小室加入500μL細胞懸液（5×104cells）。
3.5通過進樣口在下小室加入750μL誘導劑。
3.6 在37℃，5%CO2環境下孵育培養板和對照板18-24小時（由細胞類型決定）。在549激發波長和565nm發射波長條件下進行熒光讀數。
4、數據計算
侵襲率%=受趨化劑誘導通過Matrigel基質膜的細胞平均相對熒光值/受趨化劑誘導通過未包被FluoroBlok熒光膜的細胞平均相對熒光值×100
注意：數據可以用相對熒光值RFU或侵襲百分比表示，后者在標準化數據處理中更有用。背景扣除，計算平均背景值，將其從各個孔板中扣除。
自動化操作注意事項
BD Falcon FluoroBlok 24孔板培養小室系統能適用于自動化操作系統。蓋子可以用標準機械手取走，也可用吸力取走。為了避免各孔間污染，孔板設定為一個統一的方向。為了與培養小室匹配，確保Falcon的商標均在2者上方，面向同一個方向。任何規格的槍頭都能達到小室的兩邊。包括50μL，100μL，200μL，250μL，1000μL。
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