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大鼠細胞間粘附分子1(ICAM-1)elisa試劑盒怎么檢測

時間:2017-4-21閱讀:980
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大鼠細胞間粘附分子1(ICAM-1)elisa試劑盒簡介

    ICAM-1(intercellular cell adhesion molecule-1 即細胞間黏附分子-1),又叫做CD54,屬于黏附分子中免疫球蛋白超家族(IGSF)中的成員,是介導黏附反應重要的一個黏附分子。ICAM-1 在靜息的血管內皮細胞(VEC)上呈低水平表達,通過與血管內皮細胞表面上的特異性受體結合而發揮其生物學活性。作為白血球和內皮細胞跨膜的蛋白質,ICAM1在穩定細胞間相互作用和促進白血球和內皮細胞的遷移起到重要作用。ICAM-1 的受體有LFA-1(lymphocyte function associated antigen-1, 即淋巴細胞功能相關抗原-1)和Mac-1,均屬于整合素家族。LFA-1是ICAM-1 的主要受體,而Mac-1與ICAM-1 的親和力較低,纖維蛋白原也可成為ICAM-1 的配體之一。

大鼠細胞間粘附分子1(ICAM-1)elisa試劑盒怎么檢測

1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應孔中加0.1ml,4℃ 過夜。次日,棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次。

2、加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應孔中,置37℃ 孵育1小時。然后洗滌(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。

3、加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.05ml。37℃ 孵育0.5~1小時,洗滌。

4、加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。

5、終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml

6、結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔OD值,若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。

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