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TNF-α elisa kit,TNF-a試劑盒*

時間:2016-9-18閱讀:1315
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實驗室代測服務:放免代測,WB實驗,免疫組化代測,熒光定量PCR代測,病理細胞染色代測,生化實驗代測等。

TNF的產(chǎn)生:

(1)TNF-α是一種單核因子,主要由單核細胞和巨噬細胞產(chǎn)生,LPS是較強的刺激劑。IFN-γ、M-CSF、GM-CSF對單核細胞/巨噬細胞產(chǎn)生TNF-α有刺激作用,而PGE則有抑制作用。前單核細胞系U937、前髓細胞系HL-60在PMA刺激下可產(chǎn)生較高水平的TNF-α。T淋巴細胞、T細胞雜交瘤、T淋巴樣細胞系以NK細胞等在PMA刺激下也可分泌TNF-α。SAC、PMA、抗IgM可刺激正常B細胞產(chǎn)生TNF-α。此外,中性粒細胞、LAK、星狀細胞、內(nèi)皮細胞、平滑肌細胞亦可產(chǎn)生TNF-α。 

(2)TNF-β是一種淋巴因子,抗原和絲裂原均可刺激T淋巴細胞分泌TNF-β。PMA刺激RPMI1788B淋巴母細胞可分泌高水平TNF-β。 

TNF的分子結(jié)構(gòu)和基因:

(1)人的TNF-α基因長約2.76kb,小鼠為2.78kb,結(jié)構(gòu)非常相似,均由4個外顯子和3個內(nèi)含子組成,與MHC基因群密切連鎖,分別定位于第6對和第17對染色體上。1984年從HL-60、U937等細胞中克隆成功rHu TNF-α cDNA,并在大腸桿菌中獲得高表達。 人TNF-α前體由233個氨基酸殘基組成,含76個氨基酸殘基的信號肽,切除信號肽后成熟型TNF-α為157氨基酸殘基,非糖基化,第69位和101位兩個半胱氨酸形成分子內(nèi)二硫鍵。rHu TNF-α分子量為17kDa。小鼠TNF-α前體為235氨基酸殘基,信號肽79氨基酸殘基,成熟的小鼠TNF-α(rMuTNF-α)分子量為17kDa,由156個氨基酸殘基組成,第69位和100位兩個半胱氨酸形成分子內(nèi)二硫鍵,有一個糖基化點,但糖基化不影響其生物學功能。rHu TNF-α與rMu TNF-α有79%氨基酸組成同源性,TNF-α的生物學作用似無明顯的種屬特異性。zui近有人報道通過基因工程技術(shù)表達了N端少2個氨基酸(Val、Arg)的155氨基酸人TNF-α,具有更好的生物學活性和抗腫瘤效應。此外,還有用基因工程方法,將TNF-α分子氨基端7個氨基酸殘基缺失,再將8Pro、9Ser和10Asp改為8Arg、9Lys和10Arg,或者再同時將157Leu改為157Phe,改構(gòu)后的TNF-α比天比天然TNF體外殺傷L929細胞的活性增加1000倍左右,在體內(nèi)腫瘤出血壞死效應也明顯增加。TNF-α和β發(fā)揮生物學效應的天然形式是同源的三聚體。 

(2)人 和小鼠TNF-β基因分別定位于第6和第17號染色體。HuTNF-β分子由205個氨基酸殘基組成,含34氨基酸殘基的信號肽,成熟型Hu TNF-β分子為171個氨基酸殘基,分子量25kDa。rHu TNF-β分子由202氨基酸殘基組成,包括33個氨基酸殘基的信號肽,成熟分子169個氨基酸殘基,與Hu TNF-β有79%的同源性。Hu TNF-β與Hu TNF-αDNA同源序列達56%,氨基酸水平上同源性為36%。 

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