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免疫組化組織樣本的處理方法!

時間:2016-6-29閱讀:4787
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上海信帆生物代做免疫組織實驗,為大家提供組織樣本的處理方法!

組織處理
恰當的組織處理是做好免疫組化染色的先決條件,也是決定染色成敗的內部因素,在組織細胞材料準備的過程中,不僅要求保持組織細胞形態完整,更要保持組織細胞的抗原性不受損或彌漫,防止組織自溶。如果出現自溶壞死的組織,抗原已經丟失,即使用很靈敏的檢測抗體和高超的技術,也很難檢出所需的抗原,反而往往由于組織的壞死或制片時的刀痕擠壓,在上述區域易出現假陽性結果。
1) 組織及時取材和固定
組織標本及時的取材和固定是做好免疫組化染色的關鍵*步,是有效防止組織自溶壞死,抗原丟失的開始,離體組織應盡快的進行取材,2h內,取材時所用的刀應銳利,要一刀下去切開組織,不可反復切拉組織,造成組織的擠壓,組織塊大小要適中,一般在2.5cm×2.5cm×0.2cm,切記取材時組織塊寧可面積大,千萬不能厚的原則,(也就是說組織塊的面積可以大到3cm×5cm,但組織塊的厚度千萬不能超過0.2cm,否則將不利于組織的均勻固定)。固定液快速滲透到組織內部使組織蛋白能在一定時間內迅速凝固。從而完好的保存抗原和組織細胞形態。


對于固定液的選擇,原則上講,應根據抗原的耐受性來選擇相應的固定液,但除非是專項科研項目,在病理常規工作很難做到這一點,因為病理的診斷和鑒別診斷都是在常規HE病理診斷的基礎上決定是否進行免疫組化的染色,而HE染色的常規組織處理是采用10%的中性緩沖福爾馬林或4%緩沖多聚甲醛4倍于組織體積進行組織固定,利用其滲透性強,對組織的作用均勻進行固定,但組織固定時間在l2h內,一般固定時間不應超過24小時。隨著固定時間的延長對組織抗原的檢出強度將逐漸降低。


2) 組織脫水、透明、浸蠟
組織經固定后進行脫水、透明、浸蠟和包埋。掌握的原則是脫水透明要充分但不能過,浸蠟時間要夠,溫度不能高,否則造成組織的硬脆使組織切片困難,即使能切片,由于組織的硬脆,也使切片不能完好平整,染色過程中極易脫片,對免疫組化染色抗原的定位及背景都不利,所以*脫水和二甲苯透明的時間不宜過長,正常大小的組織*脫水lh×3次,二甲苯透明lh×2次即可,浸蠟及包埋石蠟溫度不要超過65℃。
免疫組化實驗代測之免疫組化的樣本處理切片染色注意事項

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