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大鼠腎臟P選擇素ELISA試劑盒的科研實驗

時間:2014-2-27閱讀:1255
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    我們將近交5周齡190g~230g清潔級雄性Wister大鼠54只隨機分為正常對照組(NC組,n=18只)、糖尿病組(DM組,n=18只)和辛伐他汀治療組(S組,n=18只)。禁食12小時后,DM組和S組應用鏈脲佐菌素(STZ)55mg/kg溶于PH4.3,0.1mmol/L的枸櫞酸緩沖液中一次性腹腔注射,NC組注射等體積的枸櫞酸緩沖液。72h后以連續三次隨機血糖≥16.7mmol/L為造模成功。各組于成模1周后給藥,S組給予2mg/kg/d辛伐他汀生理鹽水混懸液灌胃,NC組和DM組給予等體積生理鹽水灌胃。用藥后4周、8周、12周各組取6只大鼠,稱重后分別用代謝籠收集24小時尿。清晨空腹麻醉后腔靜脈采血,分離血清,測定生化指標。切取腎臟,去掉被膜,用濾紙吸干后稱重。部分腎組織以10%中性福爾馬林固定,送病理檢查。分別用酶聯免疫吸附法(ELISA)和免疫組化法測大鼠4周、8周和12周血清及腎組織P-選擇素定量和定位表達;用放射免疫分析法測大鼠24h尿白蛋白排泄量。

   結果: 1.注射STZ72小時后,糖尿病組和辛伐他汀干預組大鼠血糖顯著增高,與對照組比較有統計學意義(P<0.05);糖尿病組和辛伐他汀干預組大鼠空腹血胰島素水平顯著低于對照組,有統計學意義(P<0.05);辛伐他汀干預組血糖及血胰島素與糖尿病組比較差異無統計學意義。

         2.4、8、12周時,與對照組比較,糖尿病組和辛伐他汀干預組大鼠24小時尿白蛋白排泄量增高,差異有統計學意義;與糖尿病組比較,辛伐他汀干預組大鼠24小時尿白蛋白排泄量降低,差異有統計學意義;糖尿病組24小時尿蛋白排泄量隨時間延長增加,差異有統計學意義。

         3.光鏡下見,對照組大鼠腎組織結構基本正常。糖尿病組大鼠腎小球體積增大,伴系膜增生,腎小管管腔內可見蛋白管型,間質有炎性細胞浸潤,且隨時間延長病變明顯。12周時腎小球體積無明顯縮小,未觀察到明顯腎小球硬化縮小。經辛伐他汀治療后,上述腎臟病理改變改善,且隨時間延長病變改善顯著。

           4.糖尿病組和辛伐他汀干預組大鼠血清可溶性P-選擇素水平較對照組組均顯著升高,有統計學意義(P<0.05);與糖尿病組比較,辛伐他汀干預組血清可溶性P-選擇素水平降低,差異有統計學意義(P<0.05)。

           5.免疫組化顯示,對照組大鼠腎小球有少量P-選擇素表達,腎小管幾乎不表達。與對照組比較,糖尿病組和辛伐他汀干預組大鼠腎小球及腎小管-間質P-選擇素表達增加,有統計學意義;與糖尿病組比較,辛伐他汀干預組P-選擇素表達降低,有統計學意義。

 

結論:P-選擇素在糖尿病腎病的早期即可出現,且與尿白蛋白排泄量呈正相關,辛伐他汀通過降低糖尿病大鼠P-選擇素的表達,減輕腎臟炎癥反應及微血栓的形成,減少糖尿病大鼠尿蛋白,進而對腎臟起到保護作用。
 

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