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多重PCR(multiplex Polymerase Chain Reaction，mPCR)也稱復(fù)合PCR，由Chambehian'于1988年提出。其基本原理與常規(guī)PCR相同，區(qū)別在于多重PCR反應(yīng)體系加入一對以上引物，各對引物分別結(jié)合在模板相對應(yīng)部位，最終擴(kuò)增出一條以上目的DNA片段。而多重PCR建庫技術(shù)是一種整合多重PCR及高通量測序的靶向測序技術(shù)。該方法具有成本低、檢測效率高、應(yīng)用靈活、適應(yīng)性廣等特點(diǎn)，在病原微生物檢測、遺傳病/腫瘤突變檢測、植物分子育種等研究中都有廣泛的應(yīng)用。
多重PCR建庫技術(shù)一覽
多重PCR建庫技術(shù)在微生物檢測中的應(yīng)用
病原tNGS
微生物多樣性檢測
16S rRNA擴(kuò)增子測序技術(shù)是微生物群落多樣性檢測常用的組學(xué)技術(shù)之一，該技術(shù)無需對微生物分離培養(yǎng)，直接提取樣本里面所有微生物的基因組，利用合適的通用引物擴(kuò)增16S rDNA/18S rDNA /ITS等高變區(qū)或其他功能基因，采用高通量測序儀Miseq、Hiseq或Novaseq對其進(jìn)行測序，通過生物信息學(xué)分析可以獲得特定實(shí)驗(yàn)樣品中細(xì)菌、真菌或古菌等的物種組成、物種豐度、系統(tǒng)進(jìn)化、群落比較等諸多信息。
多重PCR建庫技術(shù)在動植物檢測中的應(yīng)用
品種鑒定
植物分子育種
在傳統(tǒng)植物育種中，遺傳變異是通過視覺選擇進(jìn)行鑒定。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，分子標(biāo)記輔助育種解決了傳統(tǒng)利用表型篩選的作物育種方式成本高，周期長，費(fèi)時(shí)費(fèi)力的問題，逐步從“經(jīng)驗(yàn)育種"走向“精確育種"。基于多重PCR和基于目標(biāo)區(qū)域基因組序列液相捕獲精準(zhǔn)定位SNP/INDEL基因型分型測序技術(shù)，將位點(diǎn)選擇高靈活性、樣品數(shù)量靈活性、高通量、高靈敏度、低成本多項(xiàng)優(yōu)勢有效結(jié)合，實(shí)現(xiàn)對全基因組上特定基因位點(diǎn)變異的高通量靶向篩查。
遺傳多樣性分析
多重PCR靶向捕獲測序可用于對植物種群中的遺傳多樣性進(jìn)行分析。通過選擇性引物捕獲特定基因組區(qū)域并對多個(gè)樣本進(jìn)行測序比較,可以研究不同品種或種群中的遺傳差異和多態(tài)性,為植物種質(zhì)資源的保護(hù)和利用提供重要的分子標(biāo)記信息。
動植物病蟲害檢測
多重PCR技術(shù)可以針對多種植物病原真菌、細(xì)菌、病毒、線蟲等進(jìn)行靶向檢測，對病害的流行預(yù)警、溯源和防控管理等具有重要作用。
多重PCR建庫技術(shù)在疾病研究及相關(guān)檢測中的應(yīng)用
遺傳病檢測
腫瘤基因檢測
臨床腫瘤基因檢測主要有家族遺傳性腫瘤檢測（檢測胚系基因突變）、腫瘤組織體細(xì)胞基因突變檢測（腫瘤分子分型、用藥指導(dǎo)等）、游離DNA基因突變檢測（腫瘤動態(tài)監(jiān)測，耐藥評估等），腫瘤樣本靶向NGS分析的建庫方法主要有兩種：雜交捕獲法和擴(kuò)增法。泛生子一步法擴(kuò)增建庫技術(shù)（中國發(fā)明ZL201710218529.4)，利用特定引物通過一步PCR擴(kuò)增，結(jié)合生物信息算法分析，可檢測多種類型的變異信息，包括點(diǎn)突變、小片段插入/缺失、拷貝數(shù)變異、基因融合變異、甲基化修飾和RNA表達(dá)量變化等。除用于多種靶向藥基因突變進(jìn)行同時(shí)鑒定以指導(dǎo)用藥之外，對于微量DNA信號的特異性放大能力在cfDNA檢測及血液腫瘤治療后微小殘留病（MRD）的鑒定等領(lǐng)域也具有極大的優(yōu)勢。
多重PCR建庫技術(shù)多領(lǐng)域賦能，滿足不同應(yīng)用的檢測需求。翌圣多款多重PCR建庫產(chǎn)品滿足眾多客戶的不同需求，助力多重PCR建庫技術(shù)大顯身手！
應(yīng)用 | 產(chǎn)品類別 | 產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 備注 |
病原tNGS | 逆轉(zhuǎn)錄 | Hieff NGS® 1st Strand Synthesis Kit | 12249ES | 常規(guī)逆轉(zhuǎn)錄 |
Hieff NGS® 1st Strand Synthesis Mix | 12958ES | 逆轉(zhuǎn)錄預(yù)混液 | ||
多重PCR預(yù)混液 | 4×Hieff® Multiplex PCR Master Mix | 12948ES | - | |
一步法RT-PCR | Hieff® Multiplex RT-PCR Kit | 12950ES | - | |
微生物檢測 | 16S 檢測 | 16S（V3-V4）Bacterial AmpSeq Prep Kit For Illumina | 12983ES | 16S V3-V4 |
Hieff NGS® Multiplex Long PCR Master Mix | 17228ES | 16S全長擴(kuò)增 | ||
遺傳病檢測 | 多重?cái)U(kuò)增預(yù)混液 | 2×Hieff NGS® HG Multiplex PCR Master Mix 2×高GC多重PCR預(yù)混液 | 13283ES | - |
分子育種檢測 | 多重?cái)U(kuò)增預(yù)混液 | 2×Hieff® C2P4 Blood Direct Multiplex PCR Master Mix | 13606ES | - |
腫瘤突變檢測 | 多重?cái)U(kuò)增預(yù)混液 | 5× Hieff Canace® PCR Master Mix 高保真酶預(yù)混液 （for multiplex PCR） | 10137ES | - |
