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引 言
熒光素酶報告基因檢測試劑，作為藥物研發中的核心工具，以其實時監測基因表達和信號傳遞的能力，在高通量篩選、藥效評估和靶點驗證等關鍵環節中扮演著至關重要的角色。這一技術的應用顯著提高了藥物篩選和評估的效率，加速了新藥的發現和開發過程。
熒光素酶報告基因檢測原理
熒光素酶報告基因檢測技術通過熒光素酶催化luciferin氧化成oxyluciferin并產生生物熒光，實現對螢火蟲熒光素酶活性的定量分析。該技術在miRNA靶基因驗證、啟動子轉錄活性調控等領域具有重要應用價值。通過將目標基因的調控元件插入熒光素酶基因的上下游，構建熒光素酶報告質粒，可以轉染細胞并進行相應的刺激或處理。隨后，通過裂解細胞并測定熒光素酶活性，可以評估不同刺激條件下調控元件的活性變化，從而深入理解基因表達的調控機制。
單熒光素酶和雙熒光素酶檢測應用的差異
關于報告基因檢測，主要分為單熒光素酶報告基因檢測及雙熒光素酶報告基因檢測，具體應用中，怎么知道自己的實驗是用單熒光素酶還是雙熒光素酶檢測系統呢?下面我們看一下兩者的差異。
單熒光素酶報告基因檢測系統
報告基因數量：螢火蟲熒光素酶單一報告基因；
轉染類型：單個報告基因質粒，轉染后通過藥物篩選，構建穩定表達熒光素酶的報告基因細胞株；
檢測流程：僅需檢測螢火蟲熒光素酶信號，操作簡單，檢測周期短，適合高通量藥物篩選使用；
應用場景分析：一般是通過構建穩定過表達單克隆細胞株，因為細胞株的表達量比較穩定，均一，不存在因轉染效率及細胞活率等變異情況對實驗的影響。并且操作簡單，由于只檢測螢火蟲信號，所以數據分析更加便捷，再加上檢測時間短等優勢，特別適合高通量藥物篩選，滿足大規模樣本檢測的需求。
雙熒光素酶報告基因檢測系統
報告基因數量：螢火蟲熒光素酶+海腎熒光素酶雙重報告基因；
轉染類型：兩個報告基因質粒共轉染，主要是通過瞬時轉染；
檢測流程：需要先檢測螢火蟲再檢測海腎信號，兩者的比值（Firefly/Renilla）用于最終的數據計算；
應用場景分析：一般是通過瞬時轉染，通過共轉染含有海腎熒光素酶基因的質粒作為內參，為實驗提供一個基準線，從而減少細胞活性和轉染效率等外在因素的干擾，通過比值計算，可以校正細胞數量、轉染效率和細胞活性的變異，提高實驗結果的準確性。是研究基因表達調控、信號傳導途徑和藥物篩選等領域的重要工具。
系列產品
翌圣熒光素酶報告基因檢測系列產品提供簡便、高效的定量檢測方案。單一組分設計簡化了使用流程，高靈敏度與5小時超長信號半衰期的結合，滿足大規模藥物篩選檢測需求。我們提供Bio-One Step、Steady-One Step和Bright-One Step三種產品，以適應不同靈敏度和穩定性需求。
產品名稱 | Bio-One Step | Steady-One Step | Bright-One Step |
產品貨號 | 11411ES | 11404ES | 11412ES |
應用場景及特性 | 本試劑盒在信號強度與穩定性之間做到了相對平衡。即保持了相對較高的信號強度，又在一定的時間內保持信號強度的相對穩定。 | 半衰期可持續5 h以上。尤其在前2 h發光值變化較小。適合于超高通量或384孔板檢測。 | 高靈敏度，高信號強度。適合于對靈敏度有較高要求的實驗。 |
信號半衰期 | 60 mins | 5 h以上 | 30 mins |
操作特點 | 一步法 | 一步法 | 一步法 |
上機等待時間 | 10 mins內信號基本沒有變化 | 40 mins內信號基本沒有變化 | 5 mins內信號基本沒有變化 |
產品優勢
信號半衰期久：信號半衰期最高可達5h，滿足高通量實驗需求，避免樣本量多導致的首尾孔因時間差引起的信號差異，保證結果更加穩定可靠。
熒光信號強：信號值可達8次方，檢測窗口大，為早期藥物篩選和藥效評估提供了強有力的數據支持。
操作方便：一步法操作，避免繁瑣的實驗流程，直接加入檢測試劑，等待5mins 即可上機檢測。
多種選擇：根據應用場景不同，提供了3款不同產品，可根據實驗對信號值、信號穩定性的需求進行選擇。
產品數據
翌圣不同報告基因檢測試劑性能比較
在穩定過表達螢火蟲熒光素酶的細胞株上進行三種類型檢測試劑的驗證，結果顯示，Bright-One Step產品擁有更高的信號值；Steady-One Step產品信號半衰期更久，信號更穩定；Bio-One Step產品擁有高信號值的同時還保持較長的信號半衰期。
圖1. 翌圣不同報告基因檢測試劑性能比較
翌圣Bio-One Step熒光素酶報告基因檢測試劑和競品比較
在穩定過表達螢火蟲熒光素酶的細胞株上使用翌圣Bio-One Step、競品P和競品V同時檢測，結果顯示，翌圣Bio-One Step產品信號值及信號半衰期和競品P基本保持一致，信號半衰期優于競品V。
圖2. 翌圣Bio-One Step熒光素酶報告基因檢測試劑和競品比較
翌圣Bio-One Step熒光素酶報告基因檢測試劑反復凍融測試
翌圣Bio-One Step熒光素酶報告基因檢測試劑經過反復凍融實驗，結果顯示即使經過5次凍融循環，產品性能依然保持穩定，無顯著變化。
圖3. 翌圣Bio-One Step熒光素酶報告基因檢測試劑反復凍融測試
操作流程
直接在細胞懸液中加入試劑后用槍頭吹打5次，等待5 mins，使細胞充分裂解。
上樣
每孔吸取100 μL混合液（檢測試劑+細胞培養基）到檢測板。
熒光檢測
設置酶標儀參數。將檢測板放入酶標儀，震動幾秒，檢測即可。
產品清單
產品類別 | 產品名稱 | 產品貨號 | 產品規格 |
單熒光素酶報告基因檢測試劑 | Bio-One Step Luciferase Assay Kit Bio-One Step 螢光素酶報告基因檢測試劑盒 | 11411ES60/80/81 | 100T/10×100T/1000T |
Steady-One Step Luciferase Assay Kit Steady-One Step 螢光素酶報告基因檢測試劑盒 | 11404ES60/80/81 | 100T/1000T /10×100T | |
Bright-One Step Luciferase Assay Kit Bright-One Step螢光素酶報告基因檢測試劑盒 | 11412ES60/80/81 | 100T/10×100T/1000T | |
雙熒光素酶報告基因檢測試劑 | Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit 雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒 | 11402ES60/80 | 100T/1000T |
Dual Glo Luciferase Reporter Gene Assay Kit 輝光型雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒 | 11405ES60/80 | 100T/1000T |
