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mRNA藥物是通過將編碼抗原蛋白的mRNA接種到人體，利用人體細胞內的遺傳物質進行表達合成抗原蛋白，通過抗原蛋白誘導和激活機體的免疫系統產生免疫反應，從而達到預防和治療疾病的目的。mRNA藥物以安全、高效、周期短等的優勢，能夠同時誘導產生體液免疫和細胞免疫，目前已經應用在腫瘤、傳染病、罕見病、心血管疾病等多種不同適應癥。
在mRNA藥物的研究中，合成的mRNA需要在體內完成翻譯，加帽和加尾至關重要，可以有效防止降解并促進其在真核細胞中的的翻譯。在mRNA體外合成過程中，目前可通過兩種方式完成mRNA 5’末端的加帽：一種是使用加帽酶進行轉錄后加帽，另一種是使用帽結構類似物進行共轉錄加帽。
酶法加帽
常用的是牛痘病毒加帽系統，該系統包含RNA三磷酸酶、鳥嘌呤甲基轉移酶及鳥嘌呤轉移酶、甲基供體SAM、GTP和反應buffer。牛痘病毒加帽酶是催化形成帽子結構的有效酶，其由D1和D12兩個亞基組成，兼具RNA三磷酸酯酶活性（TPase）、鳥苷酰基轉移酶活性（GTase）和鳥嘌呤甲基轉移酶活性（N7 MTase）。牛痘病毒加帽酶參與作用下的mRNA加帽過程如下圖1所示，在mRNA 5'端添加一個7-甲基鳥嘌呤帽結構（m7Gppp），即為Cap0（圖2）。
mRNA +1位核苷酸的核糖2’位羥基也可以甲基化，產物稱為Cap1，人類的mRNA都具有Cap1結構。Cap1不僅與翻譯起始有關，在針對外源RNA的先天免疫系統中，還可作為自身RNA的標志。2-O-甲基轉移酶可以在mRNA +1位核苷酸的2′-OH位置處添加一個甲基基團，最終形成最有Cap1結構的mRNA（圖3）。
圖1.Cap0的形成過程
圖2.帶有Cap0結構的mRNA
圖3.帶有Cap1結構的mRNA
共轉錄加帽
在體外轉錄反應體系中同時添加帽類似物，可實現一步法加帽，簡化了工藝流程。目前常用的帽類似物為Cap1帽類似物，加帽率可達到95%以上。Cap1的帽子結構和天然帽子結構一致，免疫原性低，并且轉錄產物的產量比較高，逐漸成為新一代的加帽技術。
翌圣生物推出Vaccinia Capping System產品，主要應用于RNA體外轉錄之后加帽，形成具有Cap1帽子結構的mRNA。
產品性能
加帽率高：加帽率可高達99%；
產品穩定性強：批次差異CV<5%；
適用性強：加帽的mRNA可應用于多種場景；
操作簡單：兩步法加帽需要的牛痘病毒加帽酶等物料均包含在試劑盒里。
產品數據
分別對2K 和4K的片段參照說明書進行操作，使用LC-MS進行加帽率檢測，加帽率都在99%以上。
2K加帽率解卷積分子量圖譜
4K加帽率解卷積分子量圖譜
對4K 片段分別進行批次間的穩定性驗證，批次間的CV<5%, 加帽率也均在99%以上。
采用CE的方法分別對2K、4K的片段進行完整度檢測，完整度均>92%。
產品列表
產品名稱 | 貨號 | 規格 |
Vaccinia Capping System | 17121ES50/60/70 | 50T/100T/500T |
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