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您看滬鼎培養大鼠胰島細胞，八步即能完成實驗
閱讀：1161 發布時間：2014-2-20 這是一項比較熱門的實驗，如果您需要用到、了解的話可以拿出空余的兩分鐘時間來閱讀下面的文章。我們把本實驗的步驟分為了八個部分，下面就來分條說明。
試劑都是有它的配制方法的，這里的實驗是培養大鼠胰島細胞，在我公司中所能看見的大鼠二字也就是試劑盒方面了，其中的種屬大鼠是非常熱銷的。我們在做這個實驗的*步就是要將一周齡Wistar大鼠斷頸處死，熱愛動漫的朋友有沒有莫名的想到了兵長呢？然后就要把它放于75%乙醇浸泡15 分鐘，無菌取出胰腺，于冰冷無菌D-Hanks’液中漂洗，用眼科剪仔細清除脂肪、包膜、血管等胰外組織，轉入青霉素小瓶中。
第二個步驟就是要加入少量無菌D-Hanks’液，用眼科剪剪成0.1-1.0 mm3 大小的碎片，用滴管輕輕吸出上層細小脂肪碎塊和油滴，再用無菌D-Hanks’液反復清洗 8~10 次，加入10 倍體積無菌消化酶液[胰蛋白酶-膠原酶消化液：0.05 g 胰蛋白酶，0.025 g Ⅴ型膠原酶(663 U/mg)，0.05 g 葡萄糖，溶于100mL 無Ca2+、Mg2+的0.01 mol/L PBS(pH 值為 7.4)溶液，用0.22 µm 微孔濾膜濾菌]，38℃±1℃消化，消化過程中不斷震蕩，10 分鐘后棄去上清液。
那么多的數字文字看上去有些眼花繚亂啊，其實操作時會發現沒有那么麻煩的。
我們第三步要用無菌D-Hanks’液將組織塊清洗 2~3 次，加入新鮮酶液繼續消化，重復上述步驟，此時組織塊邊緣模糊。
第四個步驟的時候要將組織塊浸入消化酶液中，38℃±1℃消化10 分鐘，將消化酶液與組織塊分開，組織塊重新加入新鮮消化酶液進行消化；而原消化酶液1500 rpm離心 10 分鐘，取沉淀即為消化下的細胞，重新用無菌D-Hanks’懸浮，離心，重復 1~2 次，再用培養基洗 2~3 次，用培養基懸浮即得細胞懸液。
實驗過程到這里已經說了一半了，為了完成漂亮的實驗，您在操作的時候也要注意一些小細節部分
我們第五步的時候，要將消化過的組織塊重復消化5~6 次至組織塊消化*，重復以上操作。
第六步，合并幾次所得細胞懸液，計數，調整細胞濃度為 2×105個細胞/mL，將細胞懸液接種于24 孔塑料培養板中，每孔1 mL，置于37℃，5%CO2，飽和濕度培養箱中培養。
文章看起來前面文字密密麻麻，中間有些松散。這里也能夠看出，前面的步驟流程是比較多的，到了中間就會稍微的簡單一些，因為步驟上有重復上面的，做過了的再次重復就會簡單一點。
到了第七步的時候，由于成纖維細胞貼壁要比胰島細胞迅速，接種15 h 后，輕輕振蕩培養板，將上面未貼壁的細胞接入新的培養板中，可除去部分成纖維細胞。
第八步，將新培養板中細胞培養 48 小時后，換新鮮配置的含有2.5 ng/mL 的碘乙酸的培養基培養5 h，可除去絕大部分成纖維細胞，而胰島細胞不受傷害，換不含碘乙酸的培養基洗2 次，并換不含碘乙酸的培養基在 37℃、5% CO2，飽和濕度培養箱中培養。
我們要每隔3天換培養液，獲得單層胰島細胞。
您看滬鼎培養大鼠胰島細胞，八步即能完成實驗。開學迎來，您需要大鼠elisa試劑盒的話現在個訂購七折優惠！本實驗中我們需要用到的試劑有：
1、D-Hanks’液
2、蛋白酶
3、Ⅴ型膠原酶
4、葡萄糖
5、碘乙酸
歡迎您購買我公司產品，在您實驗的過程中，如果遇到了產品以及技術的問題來電即可，我們將為您安排技術人員給您做全程的實驗指導。