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小鼠雌二醇（E2）試劑盒的實驗原理與操作步驟
閱讀：1183 發布時間：2013-12-12 使用我公司的小鼠雌二醇（E2）試劑盒的實驗目的是用于測定小鼠血清、血漿及相關液體樣本中雌二醇（E2）含量。下面我們來說一說小鼠雌二醇（E2）試劑盒的實驗原理與操作步驟。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠雌二醇（E2）水平。用純化的小鼠雌二醇（E2）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入雌二醇（E2），再與HRP 標記的雌二醇（E2）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的雌二醇（E2）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中小鼠雌二醇（E2）濃度。
操作步驟
1、標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
200pmol/L 5 號標準品150μl 的原倍標準品加入150μl 標準品稀釋液
100pmol/L 4 號標準品150μl 的5 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
50pmol/L 3 號標準品150μl 的4 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
25pmol/L 2 號標準品150μl 的3 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
12.5pmol/L 1 號標準品150μl 的2 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
2、加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，
然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4、 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此
重復5 次，拍干。
6、加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7、溫育：操作同3。
8、洗滌：操作同5。
9、顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10、終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11、測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應在加終止液后15 分鐘以內進行。