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細胞株保存技術全流程
閱讀：52 發布時間：2025-6-6一、保存方法選擇與技術參數優化
1. 短期保存（-80℃）
凍存液配方?
通用型：10% DMSO + 90% FBS，需預冷至4℃并與細胞懸液等體積混合
低毒性型：5% DMSO + 2% FBS + 3%海藻糖（適用于敏感細胞）
程序降溫?
采用梯度冷凍：
4℃ → -20℃（-1℃/min）→ -80℃（過夜）→液氮
使用程序降溫盒可替代梯度操作
2. 長期保存（液氮）
氣相保存?
溫度范圍：-150℃～-190℃，需配備氧濃度監測（＜500ppm）
液相保存?
采用雙層凍存管（耐壓＞500psi），推薦CryoBox™定位系統
二、標準化操作流程
2. 凍存分裝規范
分裝體積：≤1.5mL/管（耐高壓螺紋管）
標記信息：細胞株編號+傳代次數+凍存日期+操作者
3. 復蘇關鍵步驟
快速解凍?：37℃水浴震蕩90秒（冰晶完-全消失時終止）
梯度洗滌?：
首步加入等量預熱的無血清培養基稀釋
800g離心5分鐘去除DMSO殘留
三、質量控制體系
1. 過程監控
溫度穩定性?：
-80℃冰箱每日溫差≤±2℃，液氮罐周蒸發量＜0.5L
樣本追溯?：
建立電子檔案（含凍存液批號/操作人員/設備編號）
2. 風險控制
四、特殊細胞處理策略
1. 懸浮細胞
預處理：添加5%羥乙-基淀粉防止細胞聚集
凍存密度：調整為1×10?/mL（常規細胞的2倍）
2. 原代細胞
凍存液優化：無血清配方（含15%海藻糖+5%人血白蛋白）
分裝方式：預冷凍存管+快速分裝（操作時間＜3分鐘）