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胎牛血清白蛋白如何提取?
閱讀：1470 發(fā)布時(shí)間：2020-7-23胎牛血清白蛋白（BSA），又稱第五組分，是牛血清中的一種白蛋白，包含583個(gè)氨基酸殘基，分子量為66.430 kDa，等電點(diǎn)為4.7。牛血清白蛋白在生化實(shí)驗(yàn)中有廣泛的應(yīng)用，例如在western blot中作為Blocking agent;在酶切反應(yīng)緩沖液中加入BSA，通過(guò)提高溶液中蛋白質(zhì)的濃度，對(duì)酶起保護(hù)作用。防止酶的分解和非特異性吸附，能減輕有些酶的變性，能減輕有些不利環(huán)境因素如加熱，表面張力及化學(xué)因素引起的變性。是胎牛血清中的一種球蛋白，一般獲取胎牛血清白蛋白，常常運(yùn)用的方法是加熱法。
下面一起來(lái)看看是怎樣獲取胎牛血清白蛋白的！
一、所需材料
胎牛血清取近郊屠宰場(chǎng)，以檸檬酸三鈉為抗凝劑，血液搜集后隨即分別出血漿備用。需要的試劑有血清白蛋白；溴jia酚氯；醋酸纖維素薄膜，別的試劑均為分析純。獲取胎牛血清白蛋白需要準(zhǔn)備 LG-6型大容量冷凍離心機(jī)，DF-C型電泳儀，UV-754型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，PHS-2型酸度計(jì)。
二、具體方法
白蛋白含量測(cè)定 選用溴jia酚氯法，以胎牛血清白蛋白為規(guī)范. 白蛋白純度的測(cè)定 選用醋酸纖維素薄膜電泳法。吸光度值的測(cè)定 用分光光度計(jì)直接測(cè)定蛋白質(zhì)溶液在波長(zhǎng)為403 nm處的光吸收值，然后折算成濃度為10 g/L時(shí)牛血清白蛋白的光吸收值，用A403表明。
胎牛血清白蛋白的生產(chǎn)工藝 新鮮抗凝牛血用LC-6型大容量離心機(jī)(3 000 r/min×30 min)離心分別出血漿，加一定量的蒸餾水稀釋，再參與恰當(dāng)?shù)姆€(wěn)定劑和蛋白沉淀劑，然后按下述方法進(jìn)行試驗(yàn)處理：
1.不一樣pH值溶液對(duì)白蛋白的收率和質(zhì)量的影響 在其它條件固定的情況下，試驗(yàn)不一樣pH值對(duì)白蛋白的收率、純度及A403值的影響。
2.不一樣加熱保溫時(shí)間對(duì)白蛋白的收率和質(zhì)量的影響 在選定的pH值和其它條件固定的情況下，試驗(yàn)不一樣加熱保溫時(shí)間對(duì)白蛋白的收率、純度及A403值的影響。
3.不一樣稀釋倍數(shù)對(duì)白蛋白的收率和質(zhì)量的影響 在選定的pH值和保溫時(shí)間及其它條件固定的情況下，試驗(yàn)不一樣稀釋倍數(shù)對(duì)白蛋白的收率、純度及A403值的影響。
4.不一樣加熱溫度對(duì)白蛋白的收率和質(zhì)量的影響 在其它條件選定的情況下，試驗(yàn)不一樣加熱溫度對(duì)白蛋白的收率、純度及A403值的影響。
