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高效薄層層析板制備步驟和方法

閱讀：2753 發(fā)布時間：2022-7-25

　　高效薄層層析板是用薄層層析硅膠，用適當(dāng)?shù)恼澈蟿┏浞只旌暇鶆蚝螅?jīng)脫氣處理使用進(jìn)口涂布機(jī)械均勻地涂布在潔凈的玻璃板上，晾干后，置于恒溫鼓風(fēng)干燥箱中經(jīng)105攝氏度活化半個小時而成。板面平整光潔，薄層均勻牢固，無龜裂、氣泡、掉粉等現(xiàn)象。

　　高效薄層層析板的特點(diǎn)以及制備：

　　高效薄層層析板就是我們通常所說的硅膠板，要了解制作與操作方法必須先知道：其原理;薄層層析法是一種微量而快速的分析方法，操作容易，設(shè)備要求低，但對于每一種被分離的物質(zhì)都需要各自獨(dú)立的方法，TLC主要應(yīng)用于氨基酸、多肽、糖脂、核苷酸和生物堿類多種物質(zhì)的分離和鑒定。

　　1.樣品的溶解：將薄層層析板樣品溶于展開劑極性相近、揮發(fā)性高的有機(jī)溶劑。

　　2.點(diǎn)樣：控制上樣量，點(diǎn)樣基線距底邊2.0 cm，控制樣點(diǎn)直徑(5 mm)及點(diǎn)間距離(1-1.5 cm),避免因擴(kuò)散而影響檢測(下圖),點(diǎn)樣時必須注意勿損傷薄層表面。

　　3. 展層：展層容器必須密封，提前加入展開溶劑，使溶劑蒸氣達(dá)到平衡。展開劑不能高于上樣點(diǎn)，否則，無法求得Rf值和準(zhǔn)確判斷粗產(chǎn)物中各組分在薄層板上的相對位置。

　　4. 高效薄層層析板展開劑的選擇條件：有良好的溶解性、使待分離組分間分開、待測組分的Rf值在0.2~0.8之間、不與待測組分或吸附劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)、沸點(diǎn)適中，黏度較小、展開后組分斑點(diǎn)圓且集中、混合溶劑用新鮮配制。

　　5. 邊緣效應(yīng)：邊緣效應(yīng)是樣品在層析時，薄層板兩邊的斑點(diǎn)比中間斑點(diǎn)移動快，并向兩邊偏斜。其原因是用混合溶劑展開時，極性較弱和沸點(diǎn)較低的溶劑在薄層板兩邊沿處較易揮發(fā)，使薄層板上的展開劑比例不一，而出現(xiàn)邊緣效應(yīng)，解決邊緣效應(yīng)zui有效的方法是剪去薄層板浸入展開劑一端的兩角。

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